[發(fā)明專利]一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811580131.6
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109456959A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于殿宇;姜洋;程金菊;陳俊;唐洪琳;于長華;張欣
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法，其特征在于聚乙二醇二胺改性磁性氧化石墨烯增加載體的負(fù)載量和酶的活性，具體方法步驟如下：

步驟一：稱取1g氧化石墨烯、250mL、0.1mol/LNaOH溶液添加至燒杯中超聲45min，離心分離得到粉末并用水反復(fù)沖洗，調(diào)節(jié)其pH值為6，隨后，將100mL的蒸餾水加入到分離的粉末中，在超聲中分散30min，在氮氣保護(hù)下，將含有5.40g FeCl₃·6H₂O和2.65g FeCl₂·4H₂O的40ml蒸餾水滴加至懸浮液中，快速滴加10mL 25％的NH₃·H₂O，調(diào)節(jié)懸浮液pH值為12，在85℃，攪拌45min，冷卻至室溫，磁鐵分離并在超聲下用甲醇反復(fù)洗滌多次，得到的固體在真空條件下干燥；

步驟二：量取30mg磁性氧化石墨烯在10mL、0.01mol/L，pH7.0的磷酸鹽緩沖鹽溶液中浸泡30min，添加6mL、3mol/L的NaOH溶液，超聲處理3h，滴加HCl溶液至中性，磁鐵分離并多次水洗，真空干燥，量取10mL、1mg/mL磁性氧化石墨烯水溶液，然后加入30、35、40、45、50mg聚乙二醇二胺超聲處理5min，加入9.6mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，超聲處理30min，然后再加入38.5mg EDC攪拌反應(yīng)10、11、12、13、14h，加入巰基乙醇終止反應(yīng)，磁鐵分離，反復(fù)水洗并在真空條件下干燥；

步驟三：將10mg改性磁性氧化石墨烯加入至3mL，0.02mol/L、pH6.5的磷酸鹽緩沖溶液中，加入1、2、3、4、5mg的Novozyme435，攪拌反應(yīng)4、6、8、10、12h，磁鐵分離固定化酶，磷酸鹽緩沖液多次沖洗并真空干燥，測定載體的負(fù)載量、固定化酶的酶活和飽和磁化強(qiáng)度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法，其特征在于步驟二中調(diào)節(jié)聚乙二醇二胺含量為35、40、45mg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法，其特征在于步驟二中調(diào)節(jié)攪拌反應(yīng)時間為11、12、13h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法，其特征在于步驟三中調(diào)節(jié)Novozyme435的添加量為3、4、5mg。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改性磁性氧化石墨烯固定化脂肪酶的方法，其特征在于步驟三中攪拌反應(yīng)時間4、6、8h。