[發(fā)明專利]芽孢桿菌WZZ006及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811568108.5
• 申請日: 2018-12-21
• 公開（公告）號: CN109504634B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 章銀軍;張宏云;張全;鄭建永;程菲菲;汪釗
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P41/00;C12P7/62;C12R1/07
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.芽孢桿菌(Bacillus sp.)WZZ006，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCNO：M 2017621，保藏日期2017年10月23日，地址為中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編430072。

2.一種權(quán)利要求1所述芽孢桿菌WZZ006在拆分外消旋5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯中的應(yīng)用。

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：以芽孢桿菌WZZ006經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體冷凍干燥后的干菌體為催化劑，以外消旋5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯為底物，以pH值5.0～7.0的緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)，在20～45℃、100～300r/min條件下反應(yīng)完全后，獲得含S-(+)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的轉(zhuǎn)化液，將轉(zhuǎn)化液分離純化，獲得S-(+)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述底物初始濃度以緩沖液體積計為4.2～200mM，干菌體加入量以緩沖液體積計為2～10g/L。

5.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述催化劑按如下方法制備：

(1)斜面培養(yǎng)：將芽孢桿菌WZZ006接種至斜面培養(yǎng)基，在30℃、180r/min條件下培養(yǎng)24h，獲得斜面菌體；斜面培養(yǎng)基組成：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 1g/L，瓊脂粉15～20g/L，pH7.0，溶劑為去離子水；

(2)種子培養(yǎng)：取步驟(1)斜面菌體接種于種子培養(yǎng)基，在30℃、180r/min條件下培養(yǎng)24h，獲得種子液；種子培養(yǎng)基組成：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 1g/L，pH 7.0～7.2，溶劑為去離子水；

(3)發(fā)酵培養(yǎng)：在無菌條件下，取步驟(2)種子液以體積濃度1-2％的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃、180r/min條件下培養(yǎng)24h，獲得發(fā)酵液，取發(fā)酵液在10000rpm離心10min，棄上清液，收集濕菌體，用0.2M pH7.0的磷酸鹽緩沖液洗滌3次，收集菌體真空冷凍干燥，獲得凍干菌粉；發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：葡萄糖15g/L，牛肉膏15g/L，K₂HPO₄·3H₂O 6g/L，KH₂PO₄3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.0g/L，NaCl 0.5g/L，pH 6.5，溶劑為去離子水。

6.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述分離純化的方法為：反應(yīng)完畢后得到的轉(zhuǎn)化液，10000rpm離心10min后上層溶液真空旋蒸至干，獲得濃縮物；將濃縮物用二氯甲烷溶解，采用正相硅膠柱層析，用體積比1:3的乙酸乙酯：石油醚進(jìn)行洗脫，流速8ml/min，TLC跟蹤檢測，收集Rf＝0.30的組分，減壓濃縮至干，得產(chǎn)物S-(+)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯。