[發明專利]一種臍帶間充質干細胞在制備治療急性肺損傷藥物中的應用

在審

• 申請號: 201811565844.5
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109646457A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 潘若浪;何少杰;張強;戴玲華;王金福
• 申請（專利權）人: 杭州易文賽生物技術有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P11/00;C12N5/0775
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超;王浩然

本發明公開了一種臍帶間充質干細胞在制備治療急性肺損傷藥物中的應用，所述臍帶間充質干細胞來源于新生兒臍帶華氏膠部分，為貼壁生長的成纖維樣細胞，表達CD73、CD90和CD105，不表達CD14、CD19、CD34、CD45和HLA?DR。本發明中，臍帶間充質干細胞獲取方便、來源豐富，臍帶間充質干細胞制劑制備簡單，輸注技術簡便、易操作，改善肺功能和降低炎癥效果顯著，具有重要的臨床意義和廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及肺損傷疾病治療領域，特別涉及臍帶間充質干細胞在急性肺損傷治療中的用途及其制備方法。

背景技術

急性肺損傷(ALI)可由胃酸吸入、感染、創傷、脂肪栓塞、吸入有毒氣體等多種原因引起，炎癥反應在其病理改變中起關鍵作用。ALI治療仍缺乏特別有效的手段。目前，ALI的治療上主要以支持治療、藥物治療和輔助通氣治療為主，臨床上仍然保持著很高的病死率(約在30％～40％)，因此開發有效的ALI治療藥物和手段十分迫切。

近年來，干細胞研究的蓬勃發展為難治性疾病治療帶來了新思路和希望。研究表明間充質干細胞是來源于發育早期中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，廣泛存在于全身多種組織中，可在體外培養擴增，在細胞替代治療及組織工程方面有極大的應用價值。臍帶間充質干細胞作為一種多潛能干細胞，具有來源豐富、免疫源性低、無倫理問題等諸多優勢，已成為干細胞領域的研究熱點。

發明內容

本發明的目的是提供一種臍帶間充質干細胞在制備治療ALI藥物中的用途，即利用臍帶間充質干細胞制成的細胞懸液制劑能夠降低急性肺損傷程度、改善肺功能，為臍帶間充質干細胞提供了一種新用途。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

本發明提供一種臍帶間充質干細胞在制備治療急性肺病理和功能損傷藥物中的應用。

進一步，所述臍帶間充質干細胞為貼壁生長的成纖維樣細胞，表達CD73、CD90和CD105，不表達CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR。臍帶間充質干細胞來源于新生兒臍帶華氏膠部分，通過酶消化法結合貼壁培養分離，收集3-5代細胞備用。

進一步，所述臍帶間充質干細胞以細胞懸液的形式作用，所述細胞懸液按如下方法制備：將臍帶間充質干細胞用血清制劑于37℃，5％CO₂培養箱中培養24～48小時，0.25％胰蛋白酶-EDTA消化，生理鹽水洗滌后，再用生理鹽水懸浮，即為臍帶間充質干細胞懸液；所述血清制劑是將急性肺損傷供試血液于37℃水浴保溫30min后，3500rpm離心10min，取上清，再將上清以體積終濃度0.5-5％的量加入含體積濃度1％谷氨酰胺和體積濃度15％胎牛血清的DMEM培養液中，即為血清制劑。

進一步，所述臍帶間充質干細胞懸液中細胞濃度為0.5～5×10⁷個/ml。

進一步，所述藥物用量以臍帶間充質干細胞個數計為4～20×10⁷個/kg體重，靜脈單次輸注。

在本發明中，供試血液(即肺損傷動物或患者血清)來源于急性肺損傷動物模型或患者血液，經靜置和離心后所得上清液。臍帶間充質干細胞制備的治療急性肺損傷藥物的實際用法和用量如下：利用生理鹽水懸浮臍帶間充質干細胞，并調整濃度至(0.5～5)×10⁷個/毫升，然后按照(4～20)×10⁷個/kg體重進行靜脈輸注，單次輸注。

與現有技術相比，本發明有益效果主要體現在：本發明利用脂多糖LPS誘導的急性肺損傷小鼠模型，首次證明通過靜脈注射臍帶間充質干細胞懸液制劑能夠顯著改善急性肺損傷中血氧飽和度和氧合指數以及炎癥因子等肺功能損傷指標，尤其是用ALI患者血清處理后的臍帶間充質干細胞制劑效果更為顯著。

本公開的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。