[發(fā)明專利]表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811565176.6
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109694857B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設計）人: 張智明;柴華;梁宛楠;孫曉峰;李鑫;李建華;楊大偉;劉旭;蔣迪;孫敏娜;趙剛
• 申請（專利權）人: 哈藥集團生物疫苗有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C07K14/01;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 北京思元知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發(fā)明公開了一株表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒及其應用。本發(fā)明首先公開了一株表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒ChS?1株，其微生物保藏編號為：CGMCC?No.16820。本發(fā)明進一步公開了所述重組桿狀病毒ChS?1株在制備預防豬圓環(huán)病毒3型的藥物或試劑中的應用。本發(fā)明還公開了一種豬圓環(huán)病毒3型重組桿狀病毒滅活疫苗的制備方法，包括：增殖重組桿狀病毒ChS?1株，表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白，收獲抗原液；將抗原液滅活后與佐劑混合，乳化，即得。本發(fā)明所述重組桿狀病毒ChS?1株的Cap蛋白表達量高、病毒滴度高，所制備滅活疫苗的安全性及免疫效果好，能夠用于豬圓環(huán)病毒3型的防控。

技術領域

本發(fā)明涉及一株表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒，還涉及所述重組桿狀病毒在制備預防豬圓環(huán)病毒3型的藥物或試劑中的應用，屬于表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒的構建領域。

背景技術

豬圓環(huán)病毒(PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是一種小而無囊膜、共價閉合、環(huán)狀、單股DNA病毒，病毒粒子直徑平均為17nm，是目前獸醫(yī)學上發(fā)現(xiàn)的最小的動物病毒。

目前，PCV可分為3個基因型，即PCV-1、PCV-2和PCV3。PCV-1為非致病性PCV，PCV-2和PCV-3均對豬有致病性，可引起PMWS(斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征)，又稱PMWS相關PCV。PCV-3是由Palinski等從患病母豬及流產(chǎn)胎兒體內(nèi)首次鑒定，其基因組長2.0kb，隨后世界上許多國家和地區(qū)都有該病的報道，中國學者對國內(nèi)部分省區(qū)的PCV-3流行情況進行了調查，湛洋等對江蘇、湖南、湖北疑似豬皮炎腎炎綜合征的病豬組織樣品進行PCV-3巢式PCR檢測，結果在這些病料中檢測到PCV-3的存在；賀會利等從廣西某豬場腹瀉死亡仔豬的病料樣品中檢測到PCV-3；劉曉東等對中國10個省區(qū)106份樣品進行PCR檢測，結果表明安徽、江西、山東、福建、河南和廣西存在PCV-3陽性豬場，給中國的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。

目前，中國國內(nèi)尚無豬圓環(huán)病毒3型疫苗。由于該病傳播流行的快速以及其較高的致病性，應當引起養(yǎng)殖戶以及獸醫(yī)防控機構的高度重視，需要盡早開展針對該病研究。同時結合對PCV-2防控的成功經(jīng)驗，疫苗研制，尤其是新型的豬圓環(huán)病毒3型疫苗的研制，已是當務之急。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的第一個技術問題是提供一株表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒ChS-1株；

本發(fā)明所要解決的第二個技術問題是提供所述表達豬圓環(huán)病毒3型Cap蛋白的重組桿狀病毒ChS-1株在制備預防或治療豬圓環(huán)病毒3型的藥物或試劑中的應用。

為解決上述技術問題，本發(fā)明所采取的技術方案是：

本發(fā)明從吉林、河北和山東疑似豬圓環(huán)病毒發(fā)病的病料中提取PCV3毒株DNA，然后用特異性引物分別擴增Cap蛋白基因(ORF2)，連接至載體pOET1構建獲得重組質粒pOET1-ORF2-ChS-1、pOET1-ORF2-HaD-1和pOET1-ORF2-RiZ-1。本發(fā)明進一步將昆蟲病毒DNA(flashBACPrime)與轉移質粒(pOET1-ORF2-ChS-1、pOET1-ORF2-HaD-1和pOET1-ORF2-RiZ-1)分別共轉染Sf9昆蟲細胞，獲得3株PCV3重組桿狀病毒，分別命名為ChS-1株、HaD-1株和RiZ-1株。本發(fā)明對三株重組桿狀病毒進行病毒滴度和表達量的測定，結果表明ChS-1株的病毒滴度達到8.2×10⁷pfu/ml，120小時上清中Cap蛋白含量達58.56μg/ml。ChS-1株在病毒含量及Cap蛋白表達量上均明顯優(yōu)于其他兩個毒株。

本發(fā)明獲得的重組桿狀病毒ChS-1株，其ORF2基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示，所編碼的氨基酸序列為SEQ?IDNO.2所示。