[發明專利]一種制備胸腺法新的方法

有效

• 申請號: 201811564487.0
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111349152B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 姚志軍;尹傳龍;宓鵬程;陶安進;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/107
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 王仲凱

本發明屬于藥物化學技術領域，公開了一種制備胸腺法新的方法，采用乙酰水楊醛或乙酰水楊醛類似物對胸腺法新28肽進行選擇性N?端乙酰化制備胸腺法新。本發明不需要對胸腺法新28肽的其它氨基進行保護，避免了其它乙酰化方法需要的對賴氨酸側鏈氨基進行特殊保護會用到的昂貴原料以及繁瑣的脫除操作，大大簡化了胸腺法新28肽N?端乙酰化的難度，提高了胸腺法新收率，同時降低了成本，可以為發酵方法制備胸腺法新解決了最后一個阻礙，廣泛適合于化學方法合成的28肽胸腺法新和基因重組制備的28肽胸腺法新乙酰化制備胸腺法新。

技術領域

本發明屬于藥物化學技術領域，具體涉及一種制備胸腺法新的方法，尤其涉及一種利用選擇性乙酰化法制備胸腺法新的方法

背景技術

胸腺法新(Tαl)是一種酸性多肽，含有28個氨基酸，pI為4.2，相對分子量為3108，N端乙酰化。結構式為：

胸腺法新是一種生物反應調節因子，主要是T淋巴系統的免疫增強劑。T αl可以恢復T淋巴細胞的功能并促進成熟T細胞的增殖，促進淋巴細胞在病原組織周圍的聚集，促進淋巴因子及淋巴因子受體的產生。同時還具有刺激血管內皮細胞遷移，促進血管生成和傷口愈合等作用。在臨床上經常將Tαl 作為免疫增強劑或免疫調節劑用于各種免疫缺陷病和免疫受抑制疾病的治療以及乙型肝炎、丙型肝炎、惡性腫瘤的治療和研究。

目前胸腺法新的合成方法主要采用Fmoc固相合成。由于胸腺法新是困難多肽，在合成過程中形成β折疊，導致合成困難，純度和產量均較低。采用骨架保護基的方法雖然可以大大改善β折疊的產生，但不能在固相上進行乙酰化，只能采用骨架保護基的方法先合成28肽，然后在液相進行N端乙酰化。而由于胸腺法新序列中包括4個賴氨酸，在進行乙酰化時賴氨酸側鏈氨基也會被乙酰化，這又涉及到賴氨酸側鏈氨基的正交保護和脫保護步驟，大大加大物料成本和操作難度。

由于化學合成的成本高產量低，而且環境不友好。有很多文獻嘗試了采用基因工程重組制備胸腺法新。其中大腸桿菌作為基因工程常用菌，具有遺傳背景清楚、載體受體系統完備、生長迅速、培養簡單、重組子穩定的特點，因此很多研究者都把大腸桿菌作為首選菌種。但大腸桿菌表達的Tαl雖然與 Tαl具有相同的氨基酸組成，但N端缺少乙酰化修飾，嚴重限制了基因工程重組制備胸腺法新的應用。到目前為止，仍無基因工程制備的胸腺法新申報藥物。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于針對現有技術中存在的問題提供一種制備胸腺法新的方法，所述方法可以選擇性的對通過化學方法合成的28肽胸腺法新和基因重組制備的28肽胸腺法新N端進行乙酰化。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種制備胸腺法新的方法，包括：

步驟1：乙酰水楊醛或乙酰水楊醛類似物與胸腺法新28肽在吡啶/乙酸緩沖液中進行偶聯反應，然后去除反應溶劑；

步驟2：取步驟1所得產物與TFA溶液混合得到胸腺法新粗品的TFA溶液；

步驟3：將胸腺法新粗品的TFA溶液加入不良溶劑中沉降，離心分離析出的固體，用不良溶劑洗滌，經氮氣吹掃和干燥后制得胸腺法新粗品。

作為優選，所述乙酰水楊醛類似物具有式Ⅰ所示結構，

其中，R1獨立選自-H，-C_nH_2n+1，-OC_nH_2n+1，n＝1、2、3或4；

R2獨立選自-H，-NO₂，-S(＝O)CH₃；

R3獨立選自-H，-C_nH_2n+1，-OC_nH_2n+1，n＝1、2、3或4；