[發(fā)明專利]一種無(wú)血清無(wú)蛋白培養(yǎng)基

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811563709.7
• 申請(qǐng)日: 2018-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN109536435A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李忠;馬飛飛;李宋敖;徐遜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江橋美科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/00
• 分類號(hào): C12N5/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發(fā)明公開了一種無(wú)血清無(wú)蛋白培養(yǎng)基，包括氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、緩沖劑、酚紅、右旋糖、丙酮酸鈉、碳酸氫鈉；所述氨基酸為L(zhǎng)?丙氨酸、L?精氨酸鹽酸鹽、L?天冬酰胺、L?谷氨酸、L?天冬氨酸、L?胱氨酸二鹽酸、L?谷氨酰胺、L?甘氨酸、L?異亮氨酸、L?組氨酸鹽酸鹽、L亮氨酸、L?賴氨酸、L?蛋氨酸、L?苯丙氨酸、L?脯氨酸、L?絲氨酸、L?蘇氨酸、L?色氨酸、L?絡(luò)氨酸二鈉鹽、L?纈氨酸中的至少一種。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，保持穩(wěn)定的pH值范圍，同時(shí)酚紅能夠有效顯示培養(yǎng)基的pH值狀態(tài)；上述培養(yǎng)基完全不含蛋白、血清，生產(chǎn)成本較低，是一種化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基，有利于產(chǎn)物的分離提純，提高產(chǎn)物的品質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種無(wú)血清無(wú)蛋白培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

通常，動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)均有賴于血清的存在，在普通培養(yǎng)基中，如不加血清，絕大部分細(xì)胞不能增值。目前，血清培養(yǎng)基中通常添加的比較好的血清是牛血清。血清除了供給細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)成分外，還能促進(jìn)細(xì)胞開始合成DNA，對(duì)細(xì)胞的增殖有很大的作用。實(shí)驗(yàn)證明，血清在細(xì)胞的體外培養(yǎng)中提供了細(xì)胞增殖所必需的生長(zhǎng)因子。但哺乳動(dòng)物的血清價(jià)格昂貴，成本高不適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。而且哺乳動(dòng)物血清作為補(bǔ)加物，存在許多問(wèn)題，首先血清的來(lái)源存在問(wèn)題，血清來(lái)源于特定的地區(qū)，因而如果該地區(qū)發(fā)生災(zāi)荒或牛群中流行疾病，都可導(dǎo)致血清失去供應(yīng)源。血清批量之間的差異大，重復(fù)性差，由于血清來(lái)源于動(dòng)物，動(dòng)物個(gè)體或群體的差異及時(shí)間上的差異都能導(dǎo)致每個(gè)批號(hào)的血清不完全一樣。

從血清培養(yǎng)所面臨的問(wèn)題，我們不難看出：人們急切地需要找到能夠替代血清的物質(zhì)，從而解決血清培養(yǎng)所面臨的這一問(wèn)題。五十年代起，科學(xué)家就開始研究無(wú)血清培養(yǎng)基。目前的無(wú)血清培養(yǎng)基已進(jìn)入第三代，第一代無(wú)血清培養(yǎng)基雖然不含有血清，但含有大量的動(dòng)物或植物蛋白，如BSA或激素等，雖然它所含的總體蛋白要低于血清，但蛋白的含量依然很高，八十年代末，九十年代初，研究人員開發(fā)出了第二代無(wú)血清培養(yǎng)基，它完全不用動(dòng)物來(lái)源的蛋白，如LTI公司生產(chǎn)的CH0～S—SFM I，它采用懸浮的CHO表達(dá)蛋白，培養(yǎng)基蛋白含量很低(少于100g/m1)，使重組蛋白的純化簡(jiǎn)單，目前市售的無(wú)血清培養(yǎng)基主要是這一類。第三代無(wú)血清培養(yǎng)基現(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)，它完全不含有蛋白或含量極低。培養(yǎng)基不含任何蛋白質(zhì)，沒(méi)有任何動(dòng)物、人類蛋白或多肽，為表達(dá)產(chǎn)品的下游處理工作提供極大方便。

隨著無(wú)血清培養(yǎng)基的發(fā)展進(jìn)步，在未來(lái)對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)將會(huì)越來(lái)越簡(jiǎn)化，為生物學(xué)研究提供方便，目前無(wú)血清培養(yǎng)基的價(jià)格比較高，因此降低無(wú)血清培養(yǎng)基的成本，開發(fā)出低成本的無(wú)血清培養(yǎng)基勢(shì)在必行。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的之一是提供一種無(wú)血清無(wú)蛋白培養(yǎng)基，以解決無(wú)血清培養(yǎng)基的價(jià)格高的技術(shù)問(wèn)題。

技術(shù)方案：

一種無(wú)血清無(wú)蛋白培養(yǎng)基，包括氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、緩沖劑、酚紅、右旋糖、丙酮酸鈉、碳酸氫鈉。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述氨基酸為L(zhǎng)-丙氨酸、L-精氨酸鹽酸鹽、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-天冬氨酸、L-胱氨酸二鹽酸、L-谷氨酰胺、L-甘氨酸、L-異亮氨酸、L-組氨酸鹽酸鹽、L亮氨酸、L-賴氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-絡(luò)氨酸二鈉鹽、L-纈氨酸中的至少一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述維生素為生物素、泛酸鈣、氯化膽堿、葉酸、肌醇、煙酰胺、核黃素、鹽酸吡哆醛、鹽酸硫胺、維生素B₁₂中的至少一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述無(wú)機(jī)鹽為無(wú)水氯化鈣、氯化鉀、硝酸鉀、氯化鈉、磷酸二氫鈉中的至少一種。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述緩沖劑為HEPES。