[發明專利]一種蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811560015.8
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN111328803B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 郭淑元;張愛晶;李建德
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: A01N25/28
• 分類號: A01N25/28;A01N63/23;A01P7/04
• 代理公司: 北京睿邦知識產權代理事務所(普通合伙) 11481
• 代理人: 徐丁峰

1.一種蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊，其由作為核心的蘇云金芽胞桿菌菌體和包覆于核心外的囊壁構成，其中，所述核心為單個完整的蘇云金芽胞桿菌菌體；

所述蘇云金芽胞桿菌菌體為內部含有伴胞晶體和芽孢的完整的蘇云金芽胞桿菌菌體細胞；

所述囊壁由帶有正電荷的聚電解質大分子和帶有負電荷的聚電解質大分子作為壁材逐層交替吸附在核心的外表面形成；其中，所述帶有正電荷的殼聚糖，且所述殼聚糖的脫乙酰度≥95％；所述帶有負電荷的大分子為帶負電荷的海藻酸鈉；

所述囊壁的壁材層數N為6；

所述微膠囊的粒徑為(1-1.5μm)×(1.8-2.7μm)。

2.根據權利要求1項所述的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊的制備方法，其包括：

步驟A，將作為壁材的帶有正電荷或負電荷的聚電解質大分子與作為第一芯材的蘇云金芽胞桿菌菌體的沉淀物在鹽溶液中混合均勻，震蕩，在蘇云金芽胞桿菌菌體外表面形成第一層壁材，進一步分離處理、洗滌后，獲得壁材層數為1的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊；

步驟B，將作為壁材的帶有與前一步驟中的壁材相反電荷的聚電解質大分子與作為第二芯材的壁材層數為1的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊的沉淀物在鹽溶液中混合均勻，震蕩，在壁材層數為1的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊外表面形成第二層壁材，進一步分離處理、洗滌后，獲得壁材層數為2的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊；

步驟C，重復步驟B中N-2次，每重復一次則增加一層壁材，由此獲得壁材層數為N的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊；

其中，所述鹽溶液的pH值為7.0-7.2；

蘇云金芽胞桿菌菌體的沉淀物是通過對蘇云金芽胞桿菌菌體懸浮液進行分離、洗滌獲得，其中，所述蘇云金芽胞桿菌菌體懸浮液中的蘇云金芽胞桿菌菌體為含有伴胞晶體和芽孢的完整的蘇云金芽胞桿菌菌體細胞；

含有伴胞晶體和芽孢的完整的蘇云金芽胞桿菌菌體細胞通過在Bt進入生長平穩期，形成芽胞皮層、芽胞衣和外壁組件，并合成大量伴胞晶體后，在芽胞成熟，母細胞裂解前，在階段Ⅶ之前的階段Ⅴ到Ⅵ停止培養，將所獲得的菌懸液劑進行分離處理獲得。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述鹽溶液的摩爾濃度為0.5M；所述鹽為氯化鈉；和/或，所述壁材在鹽溶液中的濃度為0.1g/L；和/或，壁材與芯材混合的質量比為1:(1-2)。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述震蕩的時間≥20分鐘。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述蘇云金芽胞桿菌菌體懸浮液是將活化的蘇云金芽胞桿菌種子液接種到LB液體培養基中培養到對數生長期后，再轉接至LP培養基中培養20-24小時獲得。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述分離為離心分離，所述離心的轉速為5500-6000rpm，所述離心的時間為20-30分鐘。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述分離為沉淀分離，其包括先向蘇云金芽胞桿菌菌體懸浮液中加入CaCl₂水合物，高速攪拌至完全溶解，再低速攪拌至形成絮狀物，靜置沉淀；其中，所述高速攪拌的轉速為85-90rpm，所述高速攪拌的時間為5-7分鐘；所述低速攪拌的轉速為35-40rpm，所述低速攪拌的時間為10-15分鐘。

8.根據權利要求2-7中任意一項所述的方法，其特征在于，在步驟A-C中，所述分離為離心分離，所述離心的轉速為2500-3000rpm，所述離心的時間為15-30分鐘。

9.根據權利要求2-7中任意一項所述的方法，其特征在于，在步驟A-C中，所述分離為沉淀分離，其包括先向震蕩后的混合液中加入CaCl₂水合物，高速攪拌至完全溶解，再低速攪拌至形成絮狀物，靜置沉淀；所述高速攪拌的轉速為85-90rpm，所述高速攪拌的時間為5-7分鐘；所述低速攪拌的轉速為35-40rpm，所述低速攪拌的時間為10-15分鐘。

10.如權利要求1所述的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊或如權利要求2-9中任意一項所述的方法制備的蘇云金芽胞桿菌菌體微膠囊在農業病蟲害防治中的應用。