[發明專利]一種維持金針菇菌種活力的方法

有效

• 申請號: 201811554427.0
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109370923B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 劉新銳;江玉姬;吳小平;謝寶貴
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/06;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種維持金針菇菌種活力的方法，其特征在于：方法包括以下步驟：

（1）將金針菇品種‘F’的單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’從保藏管取出，接種于馬鈴薯葡萄糖固體培養基即PDA培養基中，正面放置于22～25℃恒溫生化培養箱，培養6～10d；

（2）將金針菇品種‘F’從保藏管取出，接種于PDA培養基，正面放置于22～25℃恒溫生化培養箱，培養5～7d；

（3）在無菌操作環境下，取金針菇品種‘F’新鮮菌塊，放于直徑9 cm的 PDA培養基平皿中間位置，同時接入金針菇品種‘F’的單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的菌塊，兩者相距1～1.5cm，即配對，正面放置于22～25℃恒溫生化培養箱，待兩菌絲接觸后，繼續培養3～5d；

（4）兩菌絲充分接觸后，在無菌操作環境下，從單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’的一側邊緣取菌塊，標記為‘F-1’，于新的PDA培養基，正面放置，于22～25℃恒溫生化培養箱，培養3～5d；

（5）取‘F-1’前端的菌塊于載玻片上、蓋上蓋玻片、壓片，在顯微鏡下觀察其菌絲是否有鎖狀聯合，若能觀察到即可，若不能觀察到，則增加步驟（3）中的培養時間，重復（4）、（5）步驟，直到看到鎖狀聯合；菌絲有鎖狀聯合的‘F-1’即為恢復活力的‘F’品種；

所述金針菇品種‘F’的單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’，是指將異核體的金針菇品種‘F’，經過原生質體單核化，獲得單核化的菌株‘FD1’或‘ FD2’。

2.根據權利要求1所述的一種維持金針菇菌種活力的方法，其特征在于：金針菇品種‘F’單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’ 的制備方法：

（1）將活化后的金針菇品種‘F’接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養基，靜置培養3～5 d；

（2）取新鮮菌絲于無菌的1.5mL離心管，用滅菌過的0.5 mol/L的KCl清洗2遍；

（3）加入1mL含2wt.%溶壁酶的0.5 mol/L的KCl，恒溫30℃水浴酶解1.3～1.8 h；

（4）將酶解好的菌絲液用帶棉塞的注射器過濾到1.5ml 離心管，5000rpm/min離心10min，棄上清保留沉淀；

（5）吸取0.6mol/L甘露醇1 mL懸浮沉淀，5000rpm/min離心10 min，棄上清保留沉淀；

（6）用0.6～1 mL的0.6mol/L甘露醇溶解沉淀，吸50 uL鏡檢，根據原生質體量稀釋至一個視野下2～3個原生質體，然后取150～180 u L涂布于再生培養基，25℃培養，2~3 d觀察原生質體萌發情況；

（7）原生質體萌發后在顯微鏡下將其挑起，于新的PDA培養基，菌落長至2～3 cm后，鏡檢，選擇其菌絲未看到鎖狀聯合的菌株，即為金針菇品種‘F’的單核化菌株‘FD1’或‘ FD2’。

3.根據權利要求1所述的一種維持金針菇菌種活力的方法，其特征在于：金針菇品種‘F’為農金7號。