[發(fā)明專利]無創(chuàng)超聲處理細(xì)胞在制備外泌體中的應(yīng)用、外泌體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811551714.6
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109554341B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭海榮;嚴(yán)飛;鄧志婷;肖楊
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳先進技術(shù)研究院
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N13/00;A61K35/30;A61P25/28;A61P25/16;A61P9/10;A61P25/00
• 代理公司: 深圳市科進知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44316
• 代理人: 吳乃壯

1.一種外泌體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：采用無創(chuàng)超聲處理細(xì)胞，提取得到外泌體；

包括以下步驟：將無創(chuàng)超聲處理過的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)36-60小時后提取外泌體，得到外泌體；

所述神經(jīng)細(xì)胞包括SH-SY5Y細(xì)胞；

超聲裝置對細(xì)胞培養(yǎng)皿進行刺激，總的超聲刺激時間持續(xù)5分鐘，具體超聲參數(shù)，探頭頻率：1MHz，幅值：100mV，超聲時間:5分鐘。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述無創(chuàng)超聲處理包括：在探頭頻率0.5-1.5MHz和幅值10-200mV條件下無創(chuàng)超聲細(xì)胞1-30min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述提取外泌體的方法包括：將去除神經(jīng)細(xì)胞和凋亡小體的培養(yǎng)基進行濃縮得到濃縮液，獲得濃縮液與沉淀劑作用的沉淀物，分離沉淀物得到外泌體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述沉淀劑包括聚乙二醇4000或聚乙二醇6000，

所述濃縮液和所述沉淀劑的體積比為1:0.5-1.5；

所述濃縮液和所述沉淀劑的作用條件為：2-8℃沉淀20-28小時；

所述分離沉淀物的步驟為：90000-110000×g離心1.5-2.5小時，沉淀為外泌體。

5.權(quán)利要求1-4任一項所述的制備方法制備得到的外泌體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的外泌體，其特征在于，所述外泌體中miR-27a-3p、miR-27b-3p和miR-7-5p表達豐度提高。

7.權(quán)利要求1-4任一項所述的制備方法或權(quán)利要求5或6所述的外泌體在如下A)-D)中任意一種的應(yīng)用：

A)制備預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病藥物；

B)制備預(yù)防和/或治療帕金森病藥物；

C)制備預(yù)防和/或治療脊柱損傷藥物；

D)制備預(yù)防和/或中風(fēng)后腦損傷藥物。