[發明專利]一種改性伊利石粉微生物菌劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811551057.5
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109576181B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 張冬雪;譚石勇;文亞雄;郭帥;李雪玲
• 申請（專利權）人: 湖南泰谷生態工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N11/10;B09C1/10;C12R1/025;C12R1/11;C12R1/01
• 代理公司: 長沙軒榮專利代理有限公司 43235
• 代理人: 葉碧蓮

1.一種改性伊利石粉微生物菌劑，其特征在于，包括如下重量份組分：吸附載體75-85份，混合菌發酵產物15-25份；其中，所述吸附載體為伊利石粉負載水溶性殼聚糖或其衍生物后通過乙醇改性而成；所述混合菌發酵產物為木糖氧化無色桿菌、少動鞘氨醇單胞菌和巨大芽胞桿菌的原始菌種在無菌條件下分別依次經斜面培養、搖床培養后共同接種于液體發酵培養基經發酵罐混合培養后，進行離心、濃縮干燥后所得，所述混合菌發酵產物活菌數為200-300億cfu/mL；

所述吸附載體具體制備方法為：將所述水溶性殼聚糖或其衍生物溶于水中，攪拌，然后添加所述伊利石粉，充分浸潤后攪拌20-40min，添加質量分數為70％-90％的乙醇溶液，得混合凝聚物，混合凝聚物經去離子水洗滌、過濾或離心、烘干后得吸附載體；其中，所述水溶性殼聚糖或其衍生物與所述伊利石粉的質量比滿足5-10：1；

所述混合菌發酵產物的具體制備方法包括如下步驟：

a.斜面培養：將所述木糖氧化無色桿菌、少動鞘氨醇單胞菌、巨大芽胞桿菌的原始菌種分別在無菌條件下接種于斜面培養基上，28-32℃條件下培養16-24h；

b.搖床培養：將步驟a培養的斜面菌種在無菌條件下分別接種于種子培養基中，28-32℃、140-200r/min條件下培養14-18h；

c.發酵罐混合培養：將步驟b培養好的木糖氧化無色桿菌、少動鞘氨醇單胞菌、巨大芽胞桿菌種子液在無菌條件下共同接種于液體發酵培養基中，接種量均為8％-20％，在pH6.5-7.2、罐壓0.05～0.06MPa、28-32℃、通風量1：0.4～0.6vvm的條件下，培養48-56h后，檢測活菌數達到20-30億cfu/mL時，進行離心、噴霧干燥濃縮，得混合菌發酵產物。

2.根據權利要求1所述的改性伊利石粉微生物菌劑，其特征在于，所述斜面培養基配方(g/L)為：牛肉浸膏3.0，蛋白胨5.0，氯化鈉5.0，瓊脂粉18.0，pH 7.0±0.1；

和/或，所述種子培養基配方(g/L)為：葡萄糖10.0，蛋白胨10.0，酵母膏5.0，pH 7.0±0.1；

和/或，所述發酵培養基配方(g/L)為：玉米淀粉5.0-8.0，麩皮粉5.0-8.0，蛋白胨1.0-3.0，酵母膏1.0-3.0，碳酸鈣0.5-1.5、磷酸二氫鉀0.5-1.5，硫酸鎂0.3-0.5、pH 7.0±0.1。

3.根據權利要求1所述的改性伊利石粉微生物菌劑，其特征在于，所述水溶性殼聚糖或其衍生物為殼聚糖、羧甲基殼聚糖、殼聚糖鹽酸鹽、殼聚糖季銨鹽、羥丙基殼聚糖、小分子殼聚糖中的一種或幾種。

4.一種如權利要求1-3任一項所述的改性伊利石粉微生物菌劑的制備方法，其特征在于，將所述吸附載體和混合菌發酵產物按重量份比例混合攪拌而成。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述吸附載體的制備方法為：將所述水溶性殼聚糖或其衍生物溶于水中，攪拌，然后添加所述伊利石粉，充分浸潤后攪拌20-40min，添加質量分數為70％-90％的乙醇溶液，得混合凝聚物，混合凝聚物經去離子水洗滌、過濾或離心、干燥后得吸附載體；其中，所述水溶性殼聚糖或其衍生物與所述伊利石粉的質量比滿足5-10：1。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述混合菌發酵產物的制備方法包括如下步驟：

a.斜面培養：將所述木糖氧化無色桿菌、少動鞘氨醇單胞菌、巨大芽胞桿菌的原始菌種分別在無菌條件下接種于斜面培養基上，28-32℃條件下培養16-24h；

b.搖床培養：將步驟a培養的斜面菌種在無菌條件下分別接種于種子培養基中，28-32℃、140-200r/min條件下培養14-18h；

c.發酵罐混合培養：將步驟b培養好的木糖氧化無色桿菌、少動鞘氨醇單胞菌、巨大芽胞桿菌種子液在無菌條件下共同接種于液體發酵培養基中，在pH 6.5-7.2、罐壓0.05～0.06MPa、28-32℃、通風量1：0.4～0.6vvm的條件下，培養48-56h后，檢測活菌數大于20-30億cfu/mL時，進行離心、噴霧干燥濃縮，得混合菌發酵產物。