[發明專利]PLGA納米纖維CTCs捕獲基底、其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201811548712.1
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111334426A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 裴仁軍;劉慧;孫娜
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州納米技術與納米仿生研究所
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N5/09
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹;王鋒

1.一種PLGA納米纖維CTCs捕獲基底，其特征在于包括PLGA納米纖維，連接于PLGA納米纖維表面的抗粘附分子以及與所述抗粘附分子連接的CTCs親和捕獲分子。

2.根據權利要求1所述的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底，其特征在于：所述PLGA納米纖維CTCs捕獲基底包括主要由分布在基材表面的直徑為100～500nm的PLGA納米纖維堆積而成的三維納米結構；優選的，所述PLGA為高分子聚合產物；優選的，所述PLGA納米纖維由LA與GA聚合而成。

3.根據權利要求1所述的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底，其特征在于：所述抗粘附分子包括牛血清白蛋白。

4.根據權利要求1所述的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底，其特征在于：所述CTCs親和捕獲分子包括抗上皮細胞粘附分子抗體與抗神經-鈣黏蛋白抗體的修飾化產物。

5.如權利要求1-4中任一項所述PLGA納米纖維CTCs捕獲基底的制備方法，其特征在于包括：

(1)將分子量為90～110kDa、由LA與GA按照質量比為5：1～6：1聚合形成的PLGA結晶體溶于有機溶劑體系中形成均勻、粘稠、透明PLGA電紡液；

(2)以靜電紡絲裝置將所述PLGA電紡液通過靜電紡絲方式施加于基材表面，形成PLGA納米纖維構建的三維納米結構；

(3)在所述PLGA納米纖維表面連接抗粘附分子；

(4)將CTCs親和捕獲分子與連接在所述PLGA納米纖維表面的抗粘附分子偶聯，獲得基于雙抗體修飾的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟(1)具體包括：將PLGA結晶體溶于有機溶劑體系中，于室溫下攪拌過夜，獲得透明均一的粘稠PLGA電紡液；優選地，所述有機溶劑體系包括N，N-二甲基甲酰胺溶液和四氫呋喃溶液的混合液，其中所述的N，N-二甲基甲酰胺溶液與四氫呋喃溶液的體積比為2：1～3：1；優選的，所述PLGA電紡液中PLGA結晶體的含量為25wt.％～35wt.％。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟(2)具體包括：通過靜電紡絲工藝將所述PLGA電紡液噴射于基材表面，形成PLGA納米纖維構建的三維納米結構，獲得載有PLGA納米纖維的基材；

優選的，所述靜電紡絲裝置包括高壓直流電源、微量進樣器、注射器和錫箔接收臺；

尤其優選的，所述錫箔接收臺與所述注射器的平頭針頭之間的距離為10～15cm，所述微量進樣器的進樣速度為0.3～0.8mL/h，所述高壓直流電源的電壓為18～27kV。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟(3)具體包括：

將步驟(2)所獲PLGA納米纖維在室溫下真空干燥24h以上；以及，

將所述PLGA納米纖維置于EDC/NHS的MES緩沖液中反應活化20～40min，之后與含有牛血清白蛋白的PBS溶液在2～6℃下反應過夜，從而在所述的PLGA納米纖維表面連接上抗粘附分子牛血清白蛋白，獲得PLGA納米纖維膜基底。

9.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟(4)具體包括：

使連接有所述抗粘附分子牛血清白蛋白的PLGA納米纖維膜基底與濃度不高于2.5％的戊二醛溶液反應2～4h，然后于濃度為15～25μg/mL的鏈酶親和素溶液中2～6℃下反應過夜；之后將所述PLGA納米纖維基底置于濃度不高于1mol/L的乙醇胺溶液中反應不超過15min，以封閉未完全反應的醛基基團；以及，

將連接有鏈酶親和素的PLGA納米纖維膜基底與生物素化的抗上皮細胞粘附分子抗體和生物素化的抗神經-鈣黏蛋白抗體進行配體-受體化學交聯反應，獲得所述基于雙抗體修飾的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底。

10.如權利要求1-4中任一項所述的PLGA納米纖維CTCs捕獲基底在兩種表型CTCs特異性捕獲中的應用，其特征在于，應用所述PLGA納米纖維CTCs捕獲基底進行CTCs特異性捕獲的方法包括如下步驟：將上皮特性CTC和間質特性CTC與所述PLGA納米纖維CTCs捕獲基底在細胞培養箱中孵育，對基底所捕獲CTCs進行鑒定并計數。