[發明專利]一種靶向CD24且激活NK細胞的雙特異性抗體的制備及其應用

在審

• 申請號: 201811548656.1
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109678963A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 張娟;王旻;韓月;孫福謀;王陽;王斐;蔡佳玲
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;A61P1/16
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 丁靜靜

本發明屬基因工程抗體技術領域，具體涉及一種靶向CD24且激活NK細胞的雙特異性抗體的制備及其應用。本發明利用基因工程技術將抗CD24人源化嵌合抗體cG7與具有募集和激活NK細胞活性的MICA分子通過柔性肽(Gly₄Ser)連接，穩轉于CHO?s真核表達體系，挑取穩定高表達細胞株擴大培養表達cG7?MICA；雙特異性抗體cG7?MICA利用cG7的靶向作用可以重塑MICA的功能將MICA選擇性地展示在CD24⁺腫瘤細胞表面，誘導NK細胞的免疫監視作用，并通過其Fc段的作用進一步激活NK細胞，發揮抗體依賴性的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)；通過實驗驗證，在體內外都具有殺傷CD24⁺肝癌細胞的免疫活性。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種新的可同時與白細胞分化抗原CD24(cluster of differentiation 24)和自然殺傷細胞(natural killer cells；NK cells)表面上活化型受體NKG2D(NK cell receptor NK group 2，member D)特異性結合的抗CD24人源化嵌合抗體融合人源MICA分子的雙特異性抗體cG7-MICA，其利用cG7的靶向作用可以重塑MICA的功能將MICA選擇性地展示在肝癌細胞表面，募集并激活NK細胞發揮抗體依賴性的細胞介導的細胞毒作用(Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity；ADCC)。在CD24⁺人源肝癌細胞Huh-7皮下荷瘤小鼠模型中，可有效抑制腫瘤組織的生長。cG7-MICA的設計可以避免腫瘤組織中MICA分子的脫落導致的腫瘤免疫逃逸，并且具備Fc段引導的ADCC作用，是一種具有靶向CD24分子和增強NK細胞功能的雙特異性基因工程抗體。

背景技術

腫瘤的治療一直是我們面對的棘手的難題，由于化療和手術治療對機體損傷大、預后差，腫瘤免疫療法成為當代腫瘤治療的熱點。腫瘤免疫治療旨在重塑機體自身免疫系統對腫瘤細胞的識別與殺傷能力，利用抗體與抗原或者配體與受體的特異性結合的導向性將機體天然存在的免疫細胞募集到腫瘤病灶部位，利用免疫細胞發揮殺傷腫瘤細胞的活性。因此，尋找有效的分子靶標將為實現特異性的腫瘤免疫治療提供可能性。

(一)肝癌與腫瘤相關性抗原CD24分子。

肝癌(Hepatocellular carcinoma；HCC)是最普遍的原發性腫瘤，并影響著世界上許多人的健康。它被列為全球第五大常見的癌癥并成為第二大導致癌癥死亡的原因。HCC相對于其他人類實體惡性腫瘤具有高侵襲性和轉移力的特點，因此給肝癌的治療增加了難度。在治療肝癌上已經投入了很多的努力，但都由于一些不良反應，許多用于治療晚期HCC的臨床藥物已被放棄。單一治療藥物，而包括貝伐單抗(Avastin)和西妥昔單抗(Cetuximab)在內的治療性抗體也都顯示出有限的抗HCC活性。

腫瘤相關性抗原CD24分子是一種高度糖基化的膜蛋白，在多種腫瘤細胞上表達，CD24在原發性肝癌組織中有高表達概率。并且在原發性肝癌組織中CD24的表達顯著高于腫瘤臨近組織和正常的肝組織。在腫瘤細胞中，CD24通過糖基磷脂酰肌醇錨定于細胞膜上的脂筏結構。該結構是Src家族酪氨酸激酶信號途徑的重要平臺。CD24與Src相互作用并增強Src激酶活性，進而使STAT3分子(signal transducers and activators oftranscription)形成活化態；活化的STAT3形成二聚體進入細胞核內，發揮轉錄因子的作用。說明CD24的表達與腫瘤細胞的分化、侵襲、轉移和腫瘤的復發等密切相關。這些都顯示CD24分子可以作為腫瘤細胞的特異性標記分子，可以用作為肝癌治療的分子靶標。

(二)腫瘤免疫逃逸與MICA/NKG2D信號通路。