[發明專利]一種鼠傷寒沙門氏菌外膜囊泡的提取方法有效
| 申請號： | 201811548607.8 | 申請日： | 2018-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN109554311B | 公開（公告）日： | 2022-01-14 |
| 發明（設計）人： | 敬文憲;劉永生;李學瑞;周建華;馬麗娜 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/21;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京興智翔達知識產權代理有限公司 11768 | 代理人： | 郭衛芹 |
| 地址： | 730046 甘肅*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 傷寒 沙門氏菌 外膜囊泡 提取 方法 | ||
1.一種鼠傷寒沙門氏菌外膜囊泡的提取方法，其特征在于：包括下述步驟：
（1）將鼠傷寒沙門氏菌菌液，進行10,000×g，4℃，15min離心；所述鼠傷寒沙門氏菌為敲除fliC基因的鼠傷寒沙門氏菌CVCC541；
（2）回收上清，不要將菌液沉淀倒出，進行13,000×g，4℃，15min離心；
（3）回收上清，用0.45μm PVDF膜濾器進行過濾2次；
（4）將過濾的上清進行40,000×g，4℃，2h；棄去上清；將棄去上清的沉淀物用0.01M的PBS進行重懸，再用0.45μm PVDF濾器過濾，取濾液，進行40,000×g，4℃，2h的離心，棄去上清，用PBS進行重懸。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中，所述敲除fliC基因是通過Red同源基因重組技術敲除的。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述敲除fliC基因的方法如下：
（1）設計引物：
FliC-H1P1：GCAACAGCCCAATAACATCAAGTTGTAATTGATAAGGAAAAGATCgtgtaggctggagctgcttc；
FliC-H2P2：CGCTGCCTTGATTGTGTACCACGTGTCGGTGAATCAATCGCCGGAcatatgaatatcctccttag；
（2）線性打靶片段的制備：用fliC-H1P1/fliC-H2P2，以pKD4質粒為模板，擴增兩側帶有FRT位點的Kan的fliC打靶片段；
（3）FliC基因被Kan抗性基因替換：將打靶片段導入到含有pkD46的鼠傷寒沙門氏菌CVCC541的感受態中，利用Red同源重組技術敲除鼠傷寒沙門氏菌CVCC541基因組FliC基因片段；
（4）Kan的消除：將編碼FLP重組酶的pCP20質粒導入到鼠傷寒沙門氏菌CVCC541fliC::Kan感受態中，誘導Kan的消除。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國農業科學院蘭州獸醫研究所，未經中國農業科學院蘭州獸醫研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201811548607.8/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
