[發(fā)明專利]甲氧基去甲腎上腺素發(fā)光免疫檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811548600.6
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109444416B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莊路陽;馬雷;陳小玲;陳飛;楊敏;喬曉芳;李曉霞;付光宇;吳學(xué)煒
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發(fā)明公開了一種甲氧基去甲腎上腺素發(fā)光免疫檢測試劑盒，包括檢測系統(tǒng)和樣品前處理系統(tǒng)；其中檢測系統(tǒng)包括直接或間接包被有抗甲氧基去甲腎上腺素抗體的固相載體，甲氧基去甲腎上腺素抗體溶液，親和素連接示蹤物溶液和校準(zhǔn)品；樣品前處理系統(tǒng)包括酸化液，酰化劑和堿性緩沖液。本發(fā)明克服了現(xiàn)有甲氧基去甲腎上腺素檢測方法的缺點與不足，先對尿液或血漿中甲氧基去甲腎上腺素經(jīng)過酸化、酰化前處理，采取一端為生物素的酰化劑酰化方案，使酰化后的甲氧基去甲腎上腺素被抗體識別并反應(yīng)后，結(jié)合示蹤標(biāo)記物連接的親和素的方法，準(zhǔn)確地測定樣本中的甲氧基去甲腎上腺素含量。制備的試劑盒靈敏度和精密度高，可實現(xiàn)檢測的自動化，助力嗜鉻細(xì)胞瘤的臨床診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)，尤其是涉及一種甲氧基去甲腎上腺素發(fā)光免疫檢測試劑盒。

背景技術(shù)

甲氧基去甲腎上腺素（Normetanephrine，NMN）是去甲腎上腺素的代謝產(chǎn)物，它對于嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷、高血壓病因研究及交感神經(jīng)功能研究都是一種較有用的指標(biāo)。NMN是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，屬于兒茶酚胺（CAs），是一種具有較強(qiáng)生理學(xué)活性的內(nèi)源性物質(zhì)，在大腦和神經(jīng)信號傳導(dǎo)中起著重要的作用。NMN是腎上腺素代謝的中間代謝產(chǎn)物，僅在腎上腺髓質(zhì)和嗜鉻細(xì)胞瘤及副神經(jīng)節(jié)瘤（PPGL）瘤體內(nèi)代謝生成并且以高濃度水平持續(xù)存在，故是PPGL的特異性標(biāo)記物。

在腎上腺腫瘤患者中，0. 5% ～1%是嗜鉻細(xì)胞瘤的患者，嗜鉻瘤細(xì)胞持續(xù)或間斷地大量釋放兒茶酚胺類物質(zhì)，故臨床主要有兒茶酚胺過高的癥狀，引起持續(xù)性或陣發(fā)性的高血壓和多個器官的功能及代謝紊亂，患者可出現(xiàn)頭疼、心悸、多汗三聯(lián)征及高血壓等癥狀，特別嚴(yán)重者可并發(fā)急性左心衰竭或腦血管意外。本病還可以發(fā)生低血壓，甚至休克，或出現(xiàn)高血壓和低血壓相交替的表現(xiàn)。目前，檢測血漿中的兒茶酚胺類是診斷嗜鉻細(xì)胞瘤常規(guī)的實驗室手段。臨床上，較常進(jìn)行的相關(guān)檢查指標(biāo)包括腎上腺素和去甲腎上腺素，以及甲氧基去甲腎上腺素和兒茶酚胺的代謝產(chǎn)物香草扁桃酸等。

目前甲氧基去甲腎上腺素的市場主流檢測方法主要包括高效液相色譜法（HPLC）、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定，但HPLC耗時比較久、成本高且較難實現(xiàn)批量測定，而酶聯(lián)免疫測定法缺乏準(zhǔn)確性和再現(xiàn)性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于利用發(fā)光法提供一種甲氧基去甲腎上腺素發(fā)光免疫檢測試劑盒，對尿液中甲氧基去甲腎上腺素的含量進(jìn)行檢測，以期對嗜鉻細(xì)胞瘤的及時診斷和治療提供幫助。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的甲氧基去甲腎上腺素發(fā)光免疫檢測試劑盒，包括檢測系統(tǒng)和樣品前處理系統(tǒng)；其中：

所述的檢測系統(tǒng)包括直接或間接包被有抗甲氧基去甲腎上腺素抗體的固相載體，甲氧基去甲腎上腺素抗體溶液，親和素連接示蹤物溶液和校準(zhǔn)品；

所述樣品前處理系統(tǒng)包括酸化液，酰化劑和堿性緩沖液。

所述示蹤物為金剛烷、吖啶酯、魯米諾及其衍生物、異魯米諾及其衍生物、堿性磷酸酶（ALP）或辣根過氧化物酶（HRP）中的至少一種。

所述親和素為重組或天然純化的親和素，其使用濃度為1/1000～1/20000，其緩沖液中包含1～50 g/L的BSA或其它蛋白如Casein，魚明膠等。

所述甲氧基去甲腎上腺素抗體為單克隆或多克隆抗體，所述固相包被的載體材料為磁性微球或微孔板（包括透明或不透明微孔板）。

所述磁性微球的直徑為0.1-8μm，表面連接有一種或多種活性功能基團(tuán)，包括但不限于-COOH、-NH₂、-OH，具有在外加磁場作用下可迅速被磁化，在撤走磁場后剩磁為零的屬性。

所述抗甲氧基去甲腎上腺素抗體可以通過直接或間接包被的方法包被于磁性微球上，也可以以抗體溶液的形式在反應(yīng)中連接于磁性微球上。