[發明專利]一種牛絲氨酸蘇氨酸激酶STK11干擾腺病毒的構建方法在審
| 申請號： | 201811547742.0 | 申請日： | 2018-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN109593785A | 公開（公告）日： | 2019-04-09 |
| 發明（設計）人： | 王力;昝林森;成功;張松 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12N15/861 | 分類號： | C12N15/861;C12N15/113 |
| 代理公司： | 西安恒泰知識產權代理事務所 61216 | 代理人： | 李鄭建 |
| 地址： | 712100 陜*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 腺病毒 絲氨酸蘇氨酸激酶 構建 侵染 前脂肪細胞 腺病毒構建 腺病毒載體 蛋白水平 基因功能 實驗技術 體細胞 顯著性 驗證 篩選 基因 成功 研究 | ||
【權利要求書】：
1.一種牛絲氨酸蘇氨酸激酶STK11干擾腺病毒構建方法，其特征在于，該方法首先篩選干擾效率最高的shRNA序列，然后將該shRNA序列與干擾腺病毒載體重組，構建STK11干擾腺病毒；
所述的shRNA序列為：
5’-GACGACGAGCTCTTCGACATTTCAAGAGAATGTCGAAGAGCTCGTCGTCTTTTTTAGATCTG-3’。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述篩選干擾效率最高的shRNA序列按以下步驟進行：
步驟A1，克隆秦川牛絲氨酸蘇氨酸激酶11(STK11)基因編碼區；
步驟A2，構建psicheckⅡ-STK11表達載體；
步驟A3，設計并合成靶向STK11基因的shRNA片段；
步驟A4，構建pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA表達載體；
步驟A5，shRNA干擾效率的測定與篩選。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的構建STK11干擾腺病毒按以下步驟進行：
步驟B1，構建載體pDC316-EGFP-ShRNA；
步驟B2，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒包裝；
步驟B3，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒擴增、滴度測定；
步驟B4，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒侵染效率與干擾效率的檢測。
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