[發(fā)明專利]一種提高松二糖產(chǎn)量的淀粉蔗糖酶突變體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811547298.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN109468298B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳敬;吳丹;宿玲恰;趙雅琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)（如皋）食品生物技術(shù)研究所;江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/70;C12P19/12
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種淀粉蔗糖酶突變體，其特征在于，所述突變體是通過將出發(fā)氨基酸序列為SEQID NO.1的淀粉蔗糖酶第447位氨基酸由天冬氨酸突變?yōu)槔i氨酸得到的，命名為D447V。

2.一種制備權(quán)利要求1所述淀粉蔗糖酶突變體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)根據(jù)確定的突變位點(diǎn)，設(shè)計(jì)定點(diǎn)突變的突變引物，以攜帶淀粉蔗糖酶基因的載體為模板進(jìn)行定點(diǎn)突變；構(gòu)建含編碼突變體的基因的質(zhì)粒載體；

(2)將突變體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)宿主細(xì)胞；

(3)挑選陽性克隆進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，收集菌體破壁后的上清液即為淀粉蔗糖酶突變體的粗酶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述質(zhì)粒載體為pUC系列，pET系列，或pGEX中的任意一種.

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌或真菌細(xì)胞；所述的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌。

5.一種生產(chǎn)松二糖的方法，其特征在于，所述方法是以蔗糖為底物，以權(quán)利要求1所述的一種淀粉蔗糖酶突變體為催化劑，將蔗糖轉(zhuǎn)化為松二糖。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述蔗糖的濃度為180～220g/L，所述淀粉蔗糖酶突變體的濃度為0.2～0.5U/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化是在30～40℃條件下進(jìn)行45～50h。

8.權(quán)利要求1所述的一種淀粉蔗糖酶突變體在制備含松二糖的產(chǎn)品方面的應(yīng)用。