[發明專利]檢測SMN1和SMN2基因突變的方法、引物及應用

在審

• 申請號: 201811546809.9
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109486938A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 林筱劍;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

1.檢測SMA患者c.835-44,c.840,INS7+100,INS7+215,*239位點突變情況的引物，其特征在于，包括：

兩對擴增SMN1和SMN2的c.835-44,c.840,INS7+100,INS7+215,*239位點的引物，其堿基序列為：

SMN-7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAAGTGATCCCCCTACCTCC

SMN-7-R：AACAGCTATGACCATGATTAGAACCAGAGGCTTGACGA

SMN-8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCGTCAAGCCTCTGGTTCTAA

SMN-8-R：AACAGCTATGACCATGCTGTCTCAAAAACAAACAAAAATA。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，還包括一對測序引物，其堿基序列為：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R：AACAGCTATGACCATG。

3.如權利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列SMN-7-F和SMN-7-R是擴增SMN1和SMN2基因的c.835-44，c.840，INS7+100，INS7+215位點的引物；引物序列SMN-8-F和SMN-8-R是擴增SMN1和SMN2基因的*239位點的引物。

4.如權利要求1～3之一所述的引物在制備檢測SMN1和SMN2基因c.835-44，c.840，INS7+100，INS7+215，*239位點突變情況的試劑盒中的應用。

5.檢測SMN1和SMN2基因c.835-44，c.840，INS7+100，INS7+215，*239位點突變情況的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)抽提外周血或肌肉組織中的基因組DNA；

(2)利用權利要求1所述的兩對擴增引物對步驟(1)中提取的DNA進行擴增，獲得擴增產物；

(3)利用權利要求2所述的一對測序引物對步驟(2)中的擴增產物進行測序；

(4)對測序結果進行判斷，通過判讀SMN1和SMN2基因c.835-44,c.840,INS7+100,INS7+215,*239位點的測序圖中是否有雙峰來判斷SMN1和SMN2基因是否發生純合缺失。

6.一種檢測SMN1和SMN2基因c.835-44，c.840，INS7+100，INS7+215，*239位點突變情況的試劑盒，所述試劑盒包括檢測體系PCR擴增反應液、測序體系反應液，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液包括權利要求1所述的兩對擴增引物，所述測序體系反應液包括權利要求2所述的一對測序引物。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液還包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA Polymerase。

8.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述測序體系反應液還包括EDTA、無水乙醇、75％乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。

9.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述測序體系反應液還包括測序純化液，所述測序純化液包括核酸外切酶I和牛小腸堿性磷酸酶。

10.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品。