[發明專利]一種在酵母中表達生產藻藍蛋白β亞基的方法有效
| 申請號： | 201811546540.4 | 申請日： | 2018-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN109678949B | 公開（公告）日： | 2022-05-24 |
| 發明（設計）人： | 連惠勇 | 申請（專利權）人： | 海南熱帶海洋學院 |
| 主分類號： | C07K14/795 | 分類號： | C07K14/795;C12N15/81;C12P21/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 陳歡 |
| 地址： | 570100*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酵母 表達 生產 蛋白 方法 | ||
1.一種在酵母中表達生產藻藍蛋白β亞基的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將藻藍蛋白β亞基編碼基因與載體pYES2連接，得到重組質粒，所述重組質粒含有啟動子GAL1或GAL10；所述藻藍蛋白源于極大螺旋藻；
(2)制備酵母感受態細胞，將重組質粒經電轉化法轉入酵母感受態細胞，采用YNB培養基培養得到酵母轉化子，篩選陽性酵母轉化子；所述酵母為釀酒酵母；所述YNB培養基包括以下成分：葡萄糖30～40g/L、硫酸銨0.6～0.9g/L、YNB 15～20g/L、亮氨酸20～30μg/L和色氨酸25～35μg/L，pH 5.0～5.5；培養的條件為：25～28℃、280～300r/min震蕩培養15～20h；
(3)陽性酵母轉化子轉接入發酵培養基中培養；所述發酵培養基包括以下成分：酵母粉20～25g/L、胰蛋白胨10～12g/L、葡萄糖20～25g/L、半乳糖2～5g/L、K2HPO4 0.1～0.3g/L和亮氨酸5～20μg/L，pH 5.5～6.0。
2.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白β亞基的方法，其特征在于，步驟(3)為：陽性酵母轉化子轉接入發酵培養基中，30～38℃、500～800r/min發酵培養36～48h，收集菌體，即得。
3.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白β亞基的方法，其特征在于，在發酵過程中，保持發酵罐中DO值始終維持25～30％。
4.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白β亞基的方法，其特征在于，發酵培養24h后向發酵液中添加半乳糖、色氨酸、銀杏多糖和毛子草酮的混合物，其中，半乳糖、色氨酸、銀杏多糖和毛子草酮的質量比為100:1:0.3:0.2，混合物的添加量為20g/L發酵液。
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