[發明專利]一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法

在審

• 申請號: 201811544228.1
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN109392700A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 謝宗宜
• 申請（專利權）人: 靖西市秀美邊城農業科技有限公司
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/08
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 牙斐穎

1.一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)玉米雌穗套袋：選健康無病害的玉米植株，在花絲抽出前，將羊皮袋套在雌穗上，待花絲抽出；

(2)稻穗花粉收集：水稻抽穗后開花前，每穗剪去基部幼嫩小穗，保留中上部小穗，用牛皮袋套住小穗，扎緊袋口，0.5～2h后，將套袋的稻穗輕輕彎下，輕拍紙袋，使花粉落入袋內，再次輕拍紙袋，使袋內花粉集中于口袋中間，取下牛皮袋，得水稻花粉，備用；

(3)玉米與水稻雜交：步驟(1)花絲抽出第2～4天時開始進行授粉，具體的授粉方法為：先取掉套在雌穗上的羊皮袋，將玉米雌穗上長出的花絲剪短，再用裝有營養液的刷子將營養液邊注射邊涂抹到剪短的花絲上，接著將步驟(2)收集的水稻花粉均勻撒到花絲上，最后用羊皮袋套住雌穗，并用大頭針將羊皮袋固定在玉米雌穗上，授粉完成；

(4)染色體加倍：授粉1～3d后，拿掉玉米雌穗上的羊皮袋，剝開雌穗苞葉，用解剖刀將雌穗上的種皮刮破，在子房上部1/3～1/2處，找到胚珠，用無菌針刺穿胚珠壁后，將吸取了染色體加倍液的無菌棉花塞入胚珠中，重新套上羊皮袋，繼續管理至種子成熟，收獲種子。

2.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述雌穗上長出的花絲用剪刀剪短至長度為0.5～2cm。

3.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述刷子的制作方法為：選取2～3ml標有刻度的注射器，用強力膠將長為4～5cm的軟毛固定在針筒口周圍。

4.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述營養液主要包括如下成分：松針粉2～6g/L、魔芋粉5～8g/L、紅糖20～30g/L、6-芐氨基腺嘌呤12～15mg/L和赤霉素5～10mg/L。

5.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述刷子內裝的營養液體積為1～2ml。

6.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述染色體加倍液主要包括如下成分：甲基胺草磷1.5～3mg/L、氨磺靈69～104mg/L和2,4-二氯苯氧乙酸25～35mg/L。

7.根據權利要求1所述的一種玉米×水稻遠緣雜交育成雙單倍體的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述無菌棉花吸取染色體加倍液的體積為10～20μl。