[發明專利]一種circRNA抑制血管新生領域的應用

有效

• 申請號: 201811538901.0
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109432119B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 肖振
• 申請（專利權）人: 上海卡序生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61K31/7105
• 分類號: A61K31/7105;A61K48/00;A61P9/14;A61P35/00;A61P27/02;A61P25/00;A61P9/10
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種circRNA抑制血管新生領域的應用，屬于涉及生物化學、分子生物學和醫學領域。本發明發現,hsa_circ_0007411可持續作用于眼部血管內皮細胞，改變血管生成的結構，抑制血管新生，其作用于眼部微血管內皮細胞可有效抑制90％血管形成，可有效抑制新生血管相關疾病的血管新生。本發明驗證了hsa_circ_0007411對細胞增殖遷移的作用，證明hsa_circ_0007411可明顯抑制細胞增殖遷移，對內皮細胞的增殖起到明顯的阻遏作用，對于血管內皮細胞增殖的相關疾病有重要的指導意義。

本發明一種circRNA抑制血管新生領域的應用，屬于涉及生物化學、分子生物學和醫學領域。

背景技術

血管生成(Angiogenesis)是指從已有的毛細血管或毛細血管后靜脈發展而形成新的血管，主要包括：激活期血管基底膜降解；血管內皮細胞的激活、增殖、遷移；重建形成新的血管和血管網，是一個涉及多種細胞的多種分子的復雜過程。血管形成是促血管形成因子和抑制因子協調作用的復雜過程，正常情況下二者處于平衡狀態，一旦此平衡打破就會激活血管系統，使血管生成過度或抑制血管系統使血管退化。血管生成機制復雜，參與并促進血管生成的因子也眾多，EMT腹腔液中巨噬細胞數量明顯增加，其分泌的TNF-α和IL-8可以促進血管內皮細胞的增殖，轉化生長因子-β(TGF-β)，血小板衍生內皮細胞生長因子(PD-ECGF)，乙酰肝素酶，血管生成素(angs)，骨生成素(OPN)，環氧化酶(COX-2)，缺氧誘導因子-1，層粘連蛋白(LN)，胎盤生長因子(PLGF)，Survivin，促紅細胞生成素(Epo)均參與了EMT血管形成過程(De Palma M.Nat.Rev.Cancer 2017 08；17(8)457-474)。

病理性新生血管的相關疾病包括腫瘤新生血管(Li X.Science 2018 Mar 23；359(6382)1335-1336)、腦缺血新生血管(Chang J.Nat.Med.2017；23(4)450-460)、腎臟新生血管(Amin EM.Cancer Cell 2011；20(6)768-780)、糖尿病新生血管(Hu J.Nature 2017 1214；552(7684))等。新生血管的產生為一復雜的生物學過程，牽涉多種生長因子及其訊息傳遞受體，且靶向在訊息傳遞路徑(signaling cascade)中的單一分子可能無法對疾病(例如癌癥)中不受控的血管新生提供有效的臨床治療。因此，發展可協同結合數種關鍵的血管新生因子，以有效抑制血管新生及疾病進程的創新療法的需求將不斷的增加。如今治療血管新生主要利用靶向藥物抗VEGF療法，然而針對靶向藥物的個體不敏感性及耐藥性臨床尚未有有效攻克方法。

PTPN12可抑制EGFR和腫瘤血管新生(Lin Q.Cancer Biother.Radiopharm.201833(2)60-64)。聯合抑制PTPN12受體的調節有效控制三陰性乳腺癌(Nair,A.,NatureMedicine,2018 24(4),505–511.)。PTPN12在mRNA形成過程中還有一個形式為circRNA環狀形式，circRNAs(Circular RNAs，環狀RNA分子)是一類不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴，并以共價鍵形成環形結構的非編碼RNA分子。大量研究顯示其可通過作用下游的miRNA影響mRNA的表達影響腫瘤及血管新生(Li,C.-Y.,Biomedicine&Pharmacotherapy,2017 95,1514–1519.)，但具體發生作用的circRNA尚不明確。

發明內容

本發明首先通過設計能擴增環狀RNA的特異性引物，PCR擴增出來PTPN12基因的環狀RNA，并通過一代測序的方法測定出來了環狀RNA circ-PTPN12的準確的環化位點，確定了PTPN12基因表達一種由487個核苷酸組成的，具有閉合環狀結構的環狀RNA分子。本發明還發現了hsa_circ_0007411在腫瘤新生血管，糖尿病新生血管，眼部新生血管及腦部新生血管的作用，并通過體外實驗模型驗證了其有效抑制血管新生的作用。