[發明專利]叢枝菌根真菌孢子富集篩選方法及裝置

在審

• 申請號: 201811537340.2
• 申請日: 2018-12-15
• 公開（公告）號: CN109355244A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 唐明;張翔宇;陳輝;張好強
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12M1/00
• 代理公司: 西安智萃知識產權代理有限公司 61221
• 代理人: 李炳輝

1.叢枝菌根真菌孢子富集篩選裝置，其特征在于其技術方案是：在上面敞開的箱體內分別垂直設置三道400目濾布（6），使箱體自然形成主培養容器（1）、主富集容器（3）、主富集容器（3）與副培養容器（2），在主培養容器（1）與副培養容器（2）底部分別開有若干個排水孔；

利用上述叢枝菌根真菌孢子富集篩選裝置進行篩選的方法如下：

a. 在主培養容器（1）中填充野外逆境環境中采集的新鮮宿主根際土作為培養基質，將無菌的宿主植株種植在培養基質中；

b. 在主富集容器（3）中填充粒徑為1-2mm的無菌基質至容積二分之一；

c. 在副培養容器（2）中填充粒徑為1-2mm的無菌基質，將無菌的宿主植株種植在無菌基質中；

d. 在副富集容器（4）中填充粒徑為1-2mm的無菌河沙至富集容器容積二分之一；

e 在植株培養60天內每隔15天向主培養容器（1）與副培養容器（2）中澆灌十分之一倍磷濃度的Hoagland營養液，保持培養基質濕潤；

f. 60天后向主富集容器（1）中施加Hoagland營養液至培養基質為濕潤狀態，將富集容器用PE保鮮膜封口，并間隔30天補充一次營養液；

g. 在植株培養120天后向副富集容器（4）中施加含有逆境因子的Hoagland營養液至培養基質為濕潤，將富集容器用PE保鮮膜封口，并間隔30天補充一次Hoagland營養液；

h. 在植株培養240天后保持副培養容器（2）半干旱狀態，并在第270天后收集副富集容器（4）中的培養基質，通過濕篩傾析法即可得到大量具有抗逆特性的叢枝菌根真菌孢子。

2.根據權利要求1所述的叢枝菌根真菌孢子富集篩選裝置，其特征在于：在上面敞開的箱體內分別垂直設置三道400目濾布（6），使箱體自然形成主培養容器（1）、主富集容器（3）、主富集容器（3）與副培養容器（2）；在主培養容器（1）與副培養容器（2）底部分別開有六個排水孔；

利用上述叢枝菌根真菌孢子富集篩選裝置進行篩選的方法如下：

a. 在主培養容器（1）中填充重金屬污染區、干旱半干旱區或鹽堿地的新鮮宿主根際土作為培養基質，將宿主植株種植在培養基質中；

b. 在主富集容器（3）中填充粒徑為1-2mm的無菌基質至容積二分之一；

c. 在副培養容器（2）中填充粒徑為1-2mm的無菌基質，將無菌的宿主植株種植在無菌基質中；

d. 在副富集容器（4）中填充粒徑為1-2mm的無菌河沙至富集容器容積二分之一；

e 在植株培養60天內每隔15天向主培養容器（1）與副培養容器（2）中澆灌十分之一倍磷濃度的Hoagland營養液20ml，保持培養基質濕潤；

f. 60天后向主富集容器（1）中施加Hoagland營養液50ml至培養基質為濕潤狀態，將富集容器用PE保鮮膜封口，并間隔30天補充一次營養液20ml；

g. 在植株培養120天后向副富集容器（4）中施加含有高濃度重金屬離子（如鉛濃度10g/l）、PEG6000（15%）或高濃度氯化鈉（100mmol）的Hoagland營養液50ml至培養基質為濕潤狀態，將富集容器用PE保鮮膜封口，并間隔30天補充一次Hoagland營養液20ml；

h. 在植株培養240天后保持副培養容器2半干旱狀態，并在第270天后收集副富集容器（4）中的培養基質，通過濕篩傾析法即可得到大量具有耐重金屬、耐干旱或耐鹽堿特性的叢枝菌根真菌孢子。