[發(fā)明專利]一種藥敏試驗采樣器及藥敏試驗方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811536904.0
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109406345A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡思順;袁開艷;畢丁仁;彭伏虎
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N13/00
• 分類號: G01N13/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發(fā)明公開一種藥敏試驗集采樣器及藥敏試驗方法，包含專用的采樣器，采樣器容積約5mL，內(nèi)盛裝液體培養(yǎng)基1?2mL,直徑9cm的一次性平皿盛裝的固體培養(yǎng)基1塊，藥敏試紙板1塊。使用方法如下，用無菌的一次性采樣器吸取動物活體或尸體的肝臟組織或病變組織，搖動采樣器將組織與液體培養(yǎng)基混合恒溫箱培養(yǎng)8?12h，然后用采樣器將培養(yǎng)物滴加到固體培養(yǎng)基表面，靜置3?10min，待培養(yǎng)基表面液體被吸干，再在培養(yǎng)基表面覆蓋藥敏試紙板，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)12?24h，根據(jù)抑菌圈的大小判定病料病原對藥物的敏感性，指導(dǎo)臨床選藥和用藥。本發(fā)明的簡化了藥敏試驗操作過程和步驟，可在24小時內(nèi)完成對細(xì)菌的抗菌藥物篩選。更為重要的是降低了藥敏試驗對試驗環(huán)境和操作人員的要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗菌檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及藥敏試驗采樣器及藥敏試驗方法。

背景技術(shù)

在動物養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中，尤其是隨著集約化養(yǎng)殖程度的提高，各種細(xì)菌性疾病給養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟損失備受重視，因此使用抗生素防治細(xì)菌性疾病成為常態(tài)。但由于從業(yè)者的素質(zhì)參差不齊，在養(yǎng)殖過程中存在大量不科學(xué)、盲目濫用抗生素的現(xiàn)象。造成很多致病性細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性，導(dǎo)致抗菌藥對細(xì)菌性疾病的控制效果越來越差，結(jié)果造成藥物浪費，而且還延誤病情，使死亡率升高，給養(yǎng)殖戶帶來很大的經(jīng)濟損失。同時，大量使用抗生素產(chǎn)生的耐藥菌株還可能將耐藥性基因由動物轉(zhuǎn)移給人類，對人類健康造成潛在威脅，而抗生素藥物在動物體內(nèi)的蓄積與殘留，導(dǎo)致食品安全問題，直接威脅到人類健康。

為了保證動物性食品安全，國內(nèi)外提倡無抗養(yǎng)殖。如何避免濫用抗生素，科學(xué)地使用藥物，藥敏試驗在臨床診斷中的應(yīng)用就顯得非常重要。藥敏試驗旨在了解病原微生物對各種抗生素的敏感(或耐受)程度，以指導(dǎo)臨床合理選用抗生素藥物的微生物學(xué)試驗。利用藥敏實驗不僅可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性，及時了解養(yǎng)殖場內(nèi)病原微生物的耐藥情況，更重要的是指導(dǎo)臨床科學(xué)合理用藥，避免盲目用藥，養(yǎng)殖戶可根據(jù)藥敏試驗結(jié)果自主的靈活選藥，可以就地選出最經(jīng)濟有效的敏感藥物，既能縮短病程，又能減少費用。

藥敏實驗有多種方法，其中紙片擴散法在臨床上最常用。紙片擴散法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的固體培養(yǎng)基表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，在紙片的周圍形成一種濃度梯度。而測試菌在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的培養(yǎng)基上不生長，在抑菌范圍外的生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小可反映測試菌對測定藥物的敏感程度，抑菌圈越大說明測試菌對該藥越敏感，該藥對測試菌的最低抑菌濃度越小，臨床上使用該藥的效果可能更好。

目前，藥敏實驗需要專門的實驗環(huán)境、專業(yè)的設(shè)備和專業(yè)的技術(shù)培訓(xùn)。且存在以下三個缺點：1，周期長，藥敏試驗前必須完成病原微生物的分離鑒定，至少需要2天甚至數(shù)周；2.試驗條件苛刻，一般要在“超凈臺”中用接種環(huán)進行劃線接種。一般的養(yǎng)殖場和普通養(yǎng)殖戶無法完成藥敏實驗，必須由專業(yè)人士實施。從采集樣品到完成藥敏實驗至少需要2天，飼養(yǎng)員不能第一時間獲得病原微生物對藥物敏感性的結(jié)果，處于被動狀態(tài)。3.試驗對象種類非常有限，基本上是實驗人員主觀判斷和挑選的微生物菌落，往往是病料中數(shù)量最多微生物種類，這可能會導(dǎo)致忽視病料中其他的微生物，尤其是在存在混合感染的病例中，而其他被忽視的微生物有可能疾病的原因所在。實際操作中即使省去鑒定病原微生物，從病原微生物分離到獲得藥敏試驗結(jié)果也需要2～4天，且必須具備嚴(yán)苛的試驗條件。而定期進行藥敏試驗有助于了解當(dāng)?shù)丶?xì)菌對抗菌藥的敏感性情況，現(xiàn)急需步驟簡單，試驗條件簡單的藥敏試驗方法。專利CN1556217A雖然建立了一種“快速篩選病原微生物敏感藥物的方法”，但不能避免“少量雜菌”污染，同時該方法提及的樣本采取時需要一定的專業(yè)培訓(xùn)，如簡單的無菌操作技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有的藥敏試驗對實驗條件的限制，本發(fā)明的目的在于提供一種藥敏試驗采樣器，改進藥敏試驗的取樣方法，簡化藥敏試驗的苛刻操作條件，提高藥敏試驗選藥的準(zhǔn)確性。