[發明專利]解卷積等量異位報告離子比率

有效

• 申請號: 201811535932.0
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109932411B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: M·W·森柯
• 申請（專利權）人: 薩默費尼根有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N27/62;G01N1/34
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳潔;姬利永

一種方法包括將不同的等量異位標簽施加至多個樣品中的每一個；組合所述樣品；在組合的樣品內實行物種分離；隔離和碎裂在一定m/z范圍內的標記的母離子以產生多個報告離子，每個報告離子對應于所述等量異位標簽之一；測定在沿峰的多個點處所述多個報告離子和代表母物種的離子的強度；并且擬合在所述多個點處所述代表母物種的離子和所述多個報告離子的強度，以獲得所述多個樣品中的每一個中所述母物種的相對豐度。

技術領域

本公開大體上涉及包括解卷積等量異位報告離子比率的質譜領域。

背景技術

質譜法越來越多地被用于蛋白質和肽的定量，部分原因在于它能夠以高分辨率和低檢測限同時分析樣品中的多種蛋白質。在許多蛋白質組學研究中，需要分析大量樣品，每個樣品都含有許多個別蛋白質或肽。這種大規模研究促使研究人員開發用以增加在給定時間段內能夠分析的樣品數量的策略。增加樣品處理量的一種策略是多路復用，其中在質譜儀中組合若干樣品并一起測試。通過多路復用，每個肽樣品可以使用獨特的化學標記，使得質譜中的特定峰可以與特定樣品相關聯。

等量異位標簽(isobaric tag)是可用于肽的多路復用分析的一類化學標記。市售等量異位標簽的一些實例是TMT(串聯質量標簽試劑(Tandem Mass Tag Reagents)；ThermoScientific,Pierce Protein Research Product))和iTRAQ(等量異位素標記相對與絕對定量(Isobaric Tagging Relative Absolute Quantitation)，SCIEX)。一組等量異位標簽可以具有兩種或更多種類型，其中每種類型包含在該組內具有獨特質量的報告部分。盡管這些報告部分具有不同的質量，但是等量異位標簽包括質量歸一化部分，使得該組中的每種類型標簽的總質量相同。等量異位標簽可以共價連接到分析物上以形成標簽標記的分析物。接下來，可以使用串聯質譜法(例如MS2)使標簽標記的分析物碎裂以使報告離子釋放。報告離子的豐度由獲得的產物離子譜測定。每種類型的報告離子的相對豐度對應于樣品中特定肽的豐度。

例如，在具有四種不同樣品的多路復用研究中，這些樣品各自可以用具有獨特報告部分的等量異位標簽標記。所有標簽標記的分析物都可以在質譜儀中共隔離，因為它們具有相同的m/z值并且在所述過程中與具有不同m/z值的其它離子分離。接下來，可以使隔離的離子碎裂，使得報告離子從分析物裂解。然后，可以用質譜儀分析裂解的報告離子。此處，應測量與這四種類型的報告部分相關的四個質譜峰。然后，可以將報告部分的豐度值與每個樣品的相對肽濃度相關聯。

數據非依賴型采集(DIA)的使用正在緩慢增長，這是因為此方法簡單，并且相信它可以提供樣品或系統的非常完整的圖像，而且數據質量因儀器的進步而得到改善。然而，DIA的一個很大的缺點是與樣品多路復用存在認知不兼容。在某些情況下，由于存在干擾物種，由等量異位素標記技術測定的肽定量的準確性可能會受到影響。使用來自DIA隔離窗內并且還存在色譜重疊的組分的等量異位標簽(TMT或iTRAQ)將產生失真的比率。在這種情況下，離子隔離步驟可包括兩種或更多種標簽標記的分析物物種，它們同時在質量隔離窗和色譜隔離窗內。結果是，兩種或更多種標簽標記的分析物可產生報告基團信號，并由此使相關肽的豐度測量不準確。應該注意的是，報告部分在從肽裂解后，就變成無特征的(anonymous)(即，形成它的前體離子的屬性就會喪失)。因此，隨后不能處理裂解的報告離子強度信號以消除干擾性共隔離的離子的影響。這意味著每個樣品必須連續地注射，使得大型研究的采集時間非常長。因此，仍然需要改進的標記技術，這些標記技術可提高質譜法定量肽的準確度，尤其是在DIA的背景下。

發明內容

在第一方面，一種方法可以包括將不同的等量異位標簽施加至多個樣品中的每一個；組合樣品；在所述組合的樣品內實行物種分離；隔離和碎裂在一定m/z范圍內的標記的母離子以產生多個報告離子，每個報告離子對應于所述等量異位標簽之一；測定在沿峰的多個點處所述多個報告離子和代表母物種的離子的強度；并且擬合在所述多個點處所述代表母物種的離子和所述多個報告離子的強度，以獲得所述多個樣品中的每一個中所述母物種的相對豐度。