[發明專利]一種篩選防治帕金森病藥物的方法在審
| 申請號： | 201811529592.0 | 申請日： | 2018-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN109620971A | 公開（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發明（設計）人： | 鄧興力;錢源;陸地;李力燕 | 申請（專利權）人： | 昆明醫科大學第一附屬醫院 |
| 主分類號： | A61K49/00 | 分類號： | A61K49/00;A01K67/027;C12Q1/6883;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 650034 *** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 帕金森病藥物 動物模型 篩選 防治 蛋白檢測 多巴胺 紋狀 檢測 體內 免疫熒光法檢測 生物醫學技術 發病機制 分子基礎 帕金森病 實驗流程 治療策略 變化量 成套的 鼠模型 制備 研究 成熟 應用 | ||
1.一種篩選防治帕金森病藥物的方法，其特征在于：包括以下步驟：
①應用6-OHDA制備偏側PD鼠模型；
②Western blot和RT-PCR檢測紋狀體內多巴胺相關因子的表達量；
③免疫熒光檢測紋狀體內TH和Iba1的變化。
2.根據權利要求1所述的篩選防治帕金森病藥物的方法，其特征在于：所述步驟①中應用6-OHDA制備偏側PD鼠模型的步驟如下：
通過黑質-紋狀體通路定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型，6-OHDA的注射量為每點4μL；術后腹腔注射青霉素抗感染；術后2周，腹腔注射APO誘發旋轉行為，注射10min后，記錄大鼠旋轉圈數，共記錄30min；平均轉速≥7轉/min者定義為PD陽性，連續3周陽性的則認為造模成功。
3.根據權利要求1所述的篩選防治帕金森病藥物的方法，其特征在于：所述多巴胺相關因子包括Nurr1、DAT、Pitx3、TH。
4.根據權利要求3所述的篩選防治帕金森病藥物的方法，其特征在于：所述巴胺相關因子所用引物序列如下：
Nurr1基因的引物序列：
F：5′-AAGCCACCTTGCTTGTACCAAA-3′，
R：5′-CTTGTAGTAAACCGACCCGCTG-3′；
TH基因的引物序列：
F：5′-CAGGGCTGCTGTCTTCCTAC-3′，
R：5′-GGGCTGTCCAGTACGTCAAT-3′；
DAT基因的引物序列：
F：5′-TTGCAGCTGGCACATCTATC-3′，
R：5′-ATGCTGACCACGACCACATA-3′；
Pitx3基因的引物序列：
F：5′-CTTAGTCCCTGCCAGTACGC-3′，
R：5′-GTGAGCCAAGGGTGAATTG-3′。
5.根據權利要求1所述的篩選防治帕金森病藥物的方法，其特征在于：大鼠給藥發生在步驟①應用6-OHDA制備偏側PD鼠模型之前或之后。
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