[發明專利]一種快速恢復Steinernema feltiae感染期幼蟲的方法

在審

• 申請號: 201811529443.4
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109548756A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 顏珣;呂欣;韓日疇
• 申請（專利權）人: 廣東省生物資源應用研究所
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種快速恢復Steinernema feltiae感染期幼蟲的方法。將S.feltiae感染期幼蟲接種到人工卵液中，感染期幼蟲恢復，收集恢復的線蟲；所述的人工卵液含有柞蠶蛹血淋巴、海藻糖、雞蛋黃、脫脂奶粉、N’s鹽溶液和水。S.feltiae感染期幼蟲在人工卵液中恢復最快，且比例最高，2d后恢復率已達90.4％，因此可以應用本發明的方法快速高效的恢復S.feltiae感染期幼蟲，從而為高效快速的培養S.feltiae線蟲提供條件。

技術領域

本發明屬于昆蟲病原線蟲培養領域，具體涉及一種快速恢復Steinernemafeltiae感染期幼蟲的方法。

背景技術

昆蟲病原斯氏屬Steinernema和異小桿屬Heterorhabditis線蟲是國際上新型的高效生物殺蟲劑(Georgis et al.，2006)，從二十世紀30年代開始就被用于害蟲的防治(Smart，1995)，具有殺蟲能力強，殺蟲譜廣，能主動搜索寄主，對人畜、環境安全等優點，易于大量培養及配制產品，并能與多種化學農藥混用，對鉆蛀及地下害蟲有特效(Kaya andGaugler 1993；Grewal et al.，2005；Georgis et al.，2006；Yan et al.，2013；顏珣等，2014)。

昆蟲病原線蟲的生活史起始于感染期幼蟲(Infective juveniles，IJ)攜帶共生細菌進入寄主昆蟲體內，感染期幼蟲避開昆蟲的免疫反應，在昆蟲血淋巴內釋放共生細菌(Dowds and Peters，2002)。共生細菌在昆蟲血淋巴內增殖，殺死寄主昆蟲，線蟲取食共生細菌以繁殖。當昆蟲體內營養耗盡，3齡耐受態感染期幼蟲形成，在外界環境足夠濕潤且溫度適宜時，感染期幼蟲攜帶共生細菌離開寄主昆蟲(Brown and Gaugler，1997)，搜尋新的寄主。感染期幼蟲是昆蟲病原線蟲生活史中唯一能自由存活的齡期，可使用普通的噴霧器進行施用以防治害蟲。感染期幼蟲能存活1到多個月，可進行產業化培養(Wright et al.，2005)。

感染期幼蟲的恢復是液體培養流程中的關鍵。如果恢復率低，第一代成蟲數量少，僅有少部分的共生細菌被取食，第一代成蟲的后代則會因為營養充足不能發育成感染期幼蟲，而形成成蟲。由于此時培養液中的共生細菌質量較差，第二代成蟲難以產生后代，所以這個具有兩代成蟲的培養過程中的感染期幼蟲產量會比僅有一代成蟲的培養過程中的感染期幼蟲產量低(Hirao and Ehlers，2010)，培養時間長，收獲時培養液中有高比例的其他齡期的線蟲，會縮短最終線蟲產品的貨架時間。

發明內容

本發明的目的是提供一種快速恢復S.feltiae感染期幼蟲的方法。

本發明的快速恢復S.feltiae感染期幼蟲的方法，包括以下步驟：

將S.feltiae感染期幼蟲接種到人工卵液中，感染期幼蟲恢復，收集恢復的線蟲；

所述的人工卵液含有柞蠶蛹血淋巴、海藻糖、雞蛋黃、脫脂奶粉、N’s鹽溶液和水。

優選，所述的人工卵液每9ml是通過以下制備方法制備的：將柞蠶蛹血淋巴3ml，無水海藻糖0.1g，雞蛋黃2.5ml，脫脂奶粉0.1g，N’s鹽溶液1ml和無菌水2.5ml混合均勻，所述的N’s鹽溶液是每升含有NaCl 7.5g，KCl 0.1g，CaCl₂ 0.2g，NaHCO₃ 0.2g，余量為水。

優選，所述的S.feltiae感染期幼蟲是S.feltiae SN感染期幼蟲。

恢復的感染期幼蟲可以接種到液體或固體培養基中繼續培養，從而可以獲得商品化的S.feltiae感染期幼蟲。