[發(fā)明專利]一種免前處理自動化提取大體積全血DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811529434.5 | 申請日： | 2018-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN109439654A | 公開（公告）日： | 2019-03-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 董濤;梁經(jīng)綸;王凌云 | 申請（專利權(quán)）人： | 長春市志昂生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 長春眾益專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 22211 | 代理人： | 余巖 |
| 地址： | 130000 吉林省長春市朝陽區(qū)高新北*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 磁性微球 全血 白細(xì)胞 前處理 吸附 自動化 裂解 紅細(xì)胞 白細(xì)胞裂解液 磁性納米微球 紅細(xì)胞裂解液 磷酸鉀緩沖液 多聚賴氨酸 體積百分比 聚丙氨酸 提取DNA 封閉液 緩沖液 活化劑 磷酸鈉 活化 交聯(lián) 微球 羧基 制備 懸浮 釋放 封閉 | ||
1.一種免前處理自動化提取大體積全血DNA的方法，其特征在于包括下列步驟：
1）制備一種能夠吸附白細(xì)胞的磁性微球A
使用活化劑將羧基磁性納米微球活化，再用含1～10%質(zhì)量體積百分比濃度的多聚賴氨酸或多聚丙氨酸的10～50mmol/L pH8.0～9.0的磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液交聯(lián)，然后用封閉液封閉，最后，將微球懸浮于10～50mmol/L pH8.0～9.0的緩沖液中，即得磁性微球A；
2）從大體積全血中提取DNA
2.1）使用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，其過程中同時用磁性微球A吸附白細(xì)胞；
2.2）使用白細(xì)胞裂解液裂解吸附在磁性微球A上的白細(xì)胞，并將釋放的DNA用磁性微球B提取出來。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免前處理自動化提取大體積全血DNA的方法，其特征在于：所述羧基磁性納米微球?yàn)楸砻嫘揎楐然拇判晕⑶駼。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免前處理自動化提取大體積全血DNA的方法，其特征在于：所述紅細(xì)胞裂解液能夠裂解紅細(xì)胞，并促進(jìn)白細(xì)胞吸附于磁性微球A，其包含促進(jìn)白細(xì)胞吸附于磁性微球A的質(zhì)量體積百分比濃度0.1～1%的非表面活性劑型磺基甜菜堿，還包含但不限于質(zhì)量體積百分比濃度0.5～5%的曲拉通或吐溫、1～10mmol／L氯化鎂或硫酸鎂，以及調(diào)節(jié)pH在8.0～9.0范圍的10～100mmol／L緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免前處理自動化提取大體積全血DNA的方法，其特征在于：所述白細(xì)胞裂解液能夠使吸附于磁性微球A表面的白細(xì)胞在加熱條件下裂解從而釋放DNA，并且促進(jìn)釋放的DNA吸附于磁性微球B，其包含但不限于質(zhì)量體積百分比濃度為1～10%的表面活性劑、2～8mol/L變性劑、10～50mmol/L EDTA，以及調(diào)節(jié)pH在7.5～8.5范圍的10～100mmol／L緩沖液。
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