[發明專利]美洲型PRRSV N蛋白抗原表位及其應用

在審

• 申請號: 201811527186.0
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109554375A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 王愛萍;張改平;栗寧;陳玉梅;周景明;祁艷華;劉紅亮;劉燕凱;張靜;馮景;寇亞婷;彭亞允
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C07K14/08;C07K16/10;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 河南科技通律師事務所 41123
• 代理人: 張曉輝;樊羿

本發明公開了一種美洲型PRRSV N蛋白抗原表位及其應用，旨在解決對PRRSV N蛋白細胞表位研究不足的技術問題。本發明設計一種短肽，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示氨基酸序列；或由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列衍生的具有同等功能的氨基酸序列。篩選一種美洲型PRRSV N蛋白抗原表位，含所述短肽的氨基酸序列。將所述短肽或所述的美洲型PRRSV N蛋白抗原表位在制備預防和/或治療美洲型PRRSV抗體中應用。本發明提供一種N蛋白新抗原表位，完成了對該表位的鑒定，完善了N蛋白的抗原表位圖譜，為美洲型PRRSV交叉保護性表位疫苗的研究打下基礎，對PRRSV美洲型、歐洲型的區分檢測具有重要意義。

技術領域

本發明涉及細胞免疫技術領域，具體涉及一種美洲型PRRSV N蛋白抗原表位及其應用。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproduetive and Respiratory Syndrome，PRRS）是目前世界養豬業危害最為嚴重的病毒性疾病。感染PRRSV 后母豬以生殖障礙為特征，主要表現為早產、晚期流產、死胎、木乃伊胎、發熱、厭食等，感染的仔豬表現為呼吸道癥狀，也有神經癥狀。在發病過程中會出現兩耳皮膚發紺發紫，故又稱為“藍耳病”。接觸感染、精液傳播、空氣傳播是PRRSV的主要傳播途徑，鳥類、鼠類、人類等運輸工其都可能成為本病的媒介。豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）是引起該病的致病因子。該病毒有兩種主要的血清型類型，分別是基因I型（歐洲型）和II型（美洲型）。歐洲型以 Lelystad 株（LV 株）為代表，美洲型以 VR2332 株為代表。感染PRRSV的豬和感染后康復的豬都能排毒，有研究報道能分別從感染后210天的血清、42天的唾液、43～92天的精液、38天的糞便、21天的鼻腔液、28天的尿液、157天的口腔刮脫物中分離到病毒。

表位是病毒結構蛋白的重要抗原元件，一般為2～18氨基酸序列，在誘導和細胞介導的病毒免疫反應中發揮重要作用。根據它們各自的受體不同，表位可以分類為B細胞表位和T細胞表位，同時根據結構不同，表位又分為線性表位和構象表位。

表位的研究對于完善病毒蛋白結構及病毒與宿主作用關系的研究意義重大，同時對病毒的檢測，表位疫苗的制備提供材料基礎應用價值巨大。

國內外對于PRRSV N蛋白表位的研究并不是非常完善，Meulenberg等人用肽掃描技術對PRRSV I 型N蛋白表位進行分析，得到2～12，25～30，40～463段B細胞表位；多年后，Plagemann等人用基于肽掃描方法對PRRSV II 型N蛋白表位進行分析，得到23～33，31～50，43～563段B細胞表位；T.Q.An等用噬菌體展示技術結合生物套選法對PRRSV II 型N蛋白表位進行分析，獲得表位78～87。選擇合適的靶抗原研制新型PRRSV疫苗是免疫預防PRRS的研究重點。

然而，如何獲得合適的疫苗靶抗原及其表位研制新型PRRSV表位疫苗或藥物則一直是本領域技術人員所努力解決的技術難題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種美洲型PRRSV N蛋白抗原表位及其應用，以解決對PRRSV N蛋白細胞表位研究不足的技術問題。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

設計一種短肽，其氨基酸序列為

（1）如SEQ NO.1所示氨基酸序列；或

（2）由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列衍生的具有同等功能的氨基酸序列。

篩選一種美洲型PRRSV N蛋白抗原表位，具有所述短肽的氨基酸序列。

優選的，所述表位是一種位于N蛋白柔性區的B細胞表位，該區域為PRRSV N 蛋白RNA的結合區。

優選的，所述表位為構象性表位。