[發明專利]人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的GluN1/GluN2A四聚體的表達及其應用

有效

• 申請號: 201811525532.1
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN111320684B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 竺淑佳;謝春;張金寶;宋楠;崔恒祥;鄧波;陳向軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院腦科學與智能技術卓越創新中心;復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;G01N33/53
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的突變體，其特征在于，其包括選自下組的亞單位突變體或其聚合體：

(a) 亞單位GluN1跨膜及胞外區突變體，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1且第612位突變為精氨酸；

(b) 亞單位GluN2A跨膜及胞外區突變體，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2且第656-657位突變為精氨酸；

(c) 包含(a)所述的亞單位GluN1跨膜及胞外區突變體和(b)所述的亞單位GluN2A跨膜及胞外區突變體的聚合體。

2.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述的聚合體為四聚體。

3.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，所述的聚合體為兩個GluN1亞單位突變體、兩個GluN2A亞單位突變體構成的四聚體。

4.分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸編碼權利要求1～3任一所述的突變體。

5.一種表達構建體或載體，其特征在于，它含有權利要求4所述的多核苷酸。

6.如權利要求5所述的表達構建體或載體，其特征在于，所述的載體為適合真核細胞表達的桿狀病毒載體。

7.如權利要求5所述的表達構建體或載體，其特征在于，其含有權利要求4所述的多核苷酸，以及與之操作性連接的：3C蛋白酶編碼基因，報告基因，和/或純化標簽編碼基因。

8.如權利要求7所述的表達構建體或載體，其特征在于，所述的3C蛋白酶編碼基因位于權利要求4所述的多核苷酸的3’端。

9.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，它含有權利要求5～8任一所述的載體，或基因組中整合有權利要求4所述的多核苷酸。

10.如權利要求9所述的宿主細胞，其特征在于，所述的細胞為能被桿狀病毒感染且表達外源蛋白的細胞。

11. 一種生產權利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的突變體的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)培養權利要求9或10所述的宿主細胞，獲得培養物；和

(2)從培養物中分離權利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的突變體。

12.權利要求1所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的突變體的用途，用于作為抗原，特異性檢測抗人源N-甲基-D-天冬氨酸抗體，所述用途為非疾病診斷性用途；或，用于制備診斷抗NMDA受體抗體陽性相關疾病的試劑或試劑盒；所述疾病為腦炎。

13. 一種提高重組的人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的穩定性及表達量的方法，其特征在于，所述方法包括：獲得野生型人源N-甲基-D-天冬氨酸受體亞單位GluN1跨膜及胞外區、其氨基酸序列如SEQ ID NO: 1，將其第612位突變為精氨酸；以及獲得野生型人源N-甲基-D-天冬氨酸受體亞單位GluN2A跨膜及胞外區、其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2，將其第656-657位突變為精氨酸。

14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，還包括：使該兩個亞單位形成聚合體。

15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述聚合體為四聚體。

16. 一種用于特異性檢測抗人源N-甲基-D-天冬氨酸抗體或用于診斷抗NMDA受體抗體陽性相關疾病的試劑盒，其特征在于，其中包含：

權利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受體的突變體；或

權利要求4所述的多核苷酸；或

權利要求5～8任一所述的表達構建體或載體；或

權利要求9或10所述的宿主細胞。