[發(fā)明專利]利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811524768.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109526739A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃鵬;曾建國(guó)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南美可達(dá)生物資源股份有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 長(zhǎng)沙楚為知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43217
• 代理人: 陶祥琲

1.一種利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)培育無(wú)菌組培苗：選取按照16小時(shí)光培養(yǎng)和8小時(shí)暗培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為4500～9000Lx，培養(yǎng)60天的無(wú)菌組培苗備用；

(2)使用無(wú)菌針頭將步驟(1)培育的無(wú)菌組培苗的幼苗葉片扎8～12個(gè)孔，然后置于MS培養(yǎng)基中，25℃下在16小時(shí)光周期下培育24～120h；

(3)提取步驟(2)經(jīng)過(guò)扎孔處理培育后的無(wú)菌組培苗中的代謝產(chǎn)物并進(jìn)行定量分析，即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法，其特征在于，

步驟(2)機(jī)械損傷的方法是用無(wú)菌解剖刀在步驟(1)培育的無(wú)菌組培苗的幼苗葉片上輕劃2～3道傷口。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法，其特征在于，

步驟(2)所得無(wú)菌組培苗在提取代謝產(chǎn)物之前應(yīng)當(dāng)立刻置于液氮中-70℃下冷凍儲(chǔ)存，待用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法，其特征在于，

步驟(3)的提取方法如下：

將步驟(2)獲取的無(wú)菌組培苗的植物組織與甲醇混合，混合比例為：0.05～0.1mg/ml，然后超聲提取30～40分鐘，并以14000～15000rpm離心15～20分鐘，并通過(guò)0.22mm膜濾器過(guò)濾，即得。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用機(jī)械損傷高效合成血根堿和白屈菜紅堿的方法，其特征在于，

步驟(1)具體為：將采摘的博落回外植體先用75％酒精浸泡，再用0.1％升汞進(jìn)行消毒處理，完成消毒滅菌處理；在無(wú)菌工作臺(tái)中，用無(wú)菌解剖刀在外植體上輕劃2～3道傷口，最后接種到MS固體培養(yǎng)基(市場(chǎng)上直接購(gòu)買的MS加水調(diào)節(jié)成4.42g/L，加30g/L蔗糖，調(diào)節(jié)pH＝5.8，加入0.3％植物凝膠調(diào)成固體培養(yǎng)基)上，置于25℃暗培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待長(zhǎng)出愈傷，再置于25℃，16小時(shí)光培養(yǎng)和8小時(shí)暗培養(yǎng)后長(zhǎng)出無(wú)菌組培苗。