[發(fā)明專利]一種淋巴結(jié)組織切片的制作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811524349.X
• 申請(qǐng)日: 2018-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN109580306B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王寬松;粟詩(shī)童;郭偉;楊芝春;周建華;傅春燕;謝斌;禹燦平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28
• 代理公司: 長(zhǎng)沙朕揚(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 錢朝輝

本發(fā)明公開了一種淋巴結(jié)組織切片的制作方法，所述淋巴結(jié)組織周圍和/或內(nèi)部附帶有脂肪組織，包括以下步驟：將淋巴結(jié)組織固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色，在固定與脫水之間還包括以下步驟：將淋巴結(jié)組織用堿性溶液處理。本發(fā)明采用堿性溶液處理淋巴結(jié)組織，可去除脂肪細(xì)胞中脂滴，使脂肪組織與淋巴組織達(dá)到相同脫水效果，從而完整連續(xù)成片。另外，采用本發(fā)明方法處理淋巴結(jié)內(nèi)部的脂肪化生區(qū)域，可避免切片時(shí)產(chǎn)生“空洞”現(xiàn)象，以獲得高質(zhì)量切片。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病理組織切片制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種淋巴結(jié)組織切片的制作方法。

背景技術(shù)

癌癥患者的淋巴結(jié)病理檢查是外科病理的日常工作之一。大量研究表明，淋巴結(jié)是否存在癌轉(zhuǎn)移與癌癥患者的預(yù)后密切相關(guān)，但目前淋巴結(jié)組織病檢的誤診率卻高達(dá)10％-30％，其主要原因是淋巴結(jié)切片不完整。由于外周脂肪或淋巴結(jié)內(nèi)部脂肪化生區(qū)域與淋巴組織的脫水效果不同，導(dǎo)致淋巴結(jié)與脂肪組織脫水后硬度不一致，切片時(shí)無(wú)法完整成片。

制作淋巴結(jié)組織切片時(shí)，淋巴結(jié)外周脂肪對(duì)切片制作有較大影響，脂肪組織會(huì)阻礙試劑與淋巴結(jié)充分接觸，導(dǎo)致淋巴結(jié)固定、脫水不充分，并且脂肪細(xì)胞中存在脂滴，也使得脂肪組織本身固定及脫水不充分。而剔除脂肪不僅耗時(shí)，并且有可能破壞淋巴結(jié)組織解剖學(xué)結(jié)構(gòu)完整性或造成較小淋巴結(jié)的丟失，從而無(wú)法精準(zhǔn)判斷淋巴結(jié)數(shù)量以及其周圍脂肪、脈管內(nèi)有無(wú)腫瘤細(xì)胞侵犯，丟失大量有價(jià)值的臨床信息。目前所報(bào)道的相關(guān)病理技術(shù)還未能很好的解決上述臨床問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的臨床問(wèn)題是以上背景技術(shù)中提到的淋巴結(jié)組織制片這一病理技術(shù)難題，提供一種高質(zhì)量的淋巴結(jié)組織切片制作方法，該方法能夠保護(hù)淋巴結(jié)及其周圍脂肪組織的完整性，保留淋巴結(jié)組織解剖學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，從而獲得更多有價(jià)值的臨床信息。為克服上述技術(shù)難題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為：

一種淋巴結(jié)組織切片的制作方法，所述淋巴結(jié)組織周圍和/或內(nèi)部附帶有脂肪組織，包括以下步驟：將淋巴結(jié)組織固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色，在固定與脫水之間還包括以下步驟：將淋巴結(jié)組織用堿性溶液處理。

本發(fā)明中，淋巴結(jié)周圍脂肪組織沒有被剔除，剔除脂肪后會(huì)破壞淋巴結(jié)組織解剖學(xué)結(jié)構(gòu)完整性，使其周圍脂肪組織和伴行脈管丟失，無(wú)法精準(zhǔn)判斷淋巴結(jié)周圍脂肪組織及伴行脈管內(nèi)有無(wú)腫瘤侵犯，損失大量臨床信息，造成不必要的誤診、漏診，不剔除淋巴結(jié)周圍脂肪組織有助于保護(hù)淋巴結(jié)組織解剖學(xué)結(jié)構(gòu)完整性，使病理診斷更加精準(zhǔn)。

上述制作方法中，優(yōu)選的，將淋巴結(jié)組織用堿性溶液處理包括以下步驟：將固定后的淋巴結(jié)組織放入60-70℃堿性溶液中浸泡5-20min。

上述制作方法中，優(yōu)選的，所述堿性溶液由強(qiáng)堿、弱堿或強(qiáng)堿弱酸鹽配制而成，所述堿性溶液中氫氧根離子的量以保證淋巴結(jié)周圍和內(nèi)部所附脂肪組織中脂滴全部反應(yīng)為準(zhǔn)，即保證脂滴全部與堿性溶液中的氫氧根離子反應(yīng)。優(yōu)選的，所述堿性溶液由弱堿或強(qiáng)堿弱酸鹽配制而成。堿在選用時(shí)，理論上只要能提供與脂滴反應(yīng)的氫氧根離子即可，但弱堿或強(qiáng)堿弱酸鹽提供的堿性環(huán)境更加柔和，對(duì)組織傷害甚微，選擇弱堿或強(qiáng)堿弱酸鹽較合適。進(jìn)一步優(yōu)選的，采用過(guò)飽和的碳酸鈉溶液配制堿性溶液。

上述制作方法中，更優(yōu)選的，堿性溶液中，控制堿性溶液的pH值為11-14。

上述制作方法中，優(yōu)選的，所述堿性溶液中含有緩沖液、保護(hù)液，所述緩沖液為磷酸緩沖鹽溶液，所述保護(hù)液為聚乙二醇，所述緩沖液的濃度為0.01-4mol/L，所述保護(hù)液的濃度為0.01-4mol/L。