[發(fā)明專利]一種檢測酪氨酸酶的化合物及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811523187.8
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109608474B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王飛翼;楊桂春;胡思思;陳祖興;盧翠芬;聶俊琦;馬超
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北大學(xué)
• 主分類號: C07D493/10
• 分類號: C07D493/10;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 武漢天力專利事務(wù)所 42208
• 代理人: 程祥

本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，具體涉及一種檢測酪氨酸酶的化合物FL?O?T的制備方法和應(yīng)用。所述化合物FL?O?T結(jié)構(gòu)通式如下：其中R₁、R₂、R₃為氫、烷基或其他常見取代基?；衔颋L?O?T可作為檢測酪氨酸酶的熒光探針，該化合物FL?O?T通過熒光素類衍生物與間羥基芐溴經(jīng)親核取代反應(yīng)合成。本發(fā)明所述化合物FL?O?T是通過熒光素類衍生物FT?OH與間羥基芐溴經(jīng)親核取代反應(yīng)合成得到。目標(biāo)化合物具有高度化學(xué)選擇性，能夠在體外和體內(nèi)跟蹤檢測酪氨酸酶，并成功實現(xiàn)監(jiān)測癌細(xì)胞和斑馬魚中酪氨酸酶的活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，涉及構(gòu)建一種用于檢測細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶（Tyr）的熒光探針，具體涉及一種檢測細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶（Tyr）的熒光探針及其制備方法和生物應(yīng)用。

背景技術(shù)

酪氨酸酶（Tyr）是一種重要的含銅氧化酶，廣泛存在于植物，動物組織和真菌中。酪氨酸酶在黑色素的合成中也發(fā)揮著重要作用，黑色素決定皮膚顏色，保護(hù)皮膚細(xì)胞中的DNA免受紫外線輻射。此外，生物系統(tǒng)中異常表達(dá)的酪氨酸酶被認(rèn)為與很多疾病有關(guān)，如皮膚病和黑色素瘤。此外，酪氨酸酶還可能誘發(fā)神經(jīng)變性，這是導(dǎo)致帕金森病的原因。因此，開發(fā)一種靈敏的選擇性方法來評估該生物標(biāo)志物對于了解其在各種生物和病理過程中的作用具有重要價值，并為酪氨酸酶相關(guān)疾病的診斷提供重要參考。

到目前為止，已經(jīng)開發(fā)了幾種用于檢測酪氨酸酶的分析方法，例如比色法，電化學(xué)分析和基于納米顆粒的方法。 然而，這些方法具有低靈敏度和不適合于活體樣品中的實時成像等缺點。 熒光探針是功能強大的工具，由于其超靈敏度，高選擇性和高空間分辨率。迄今為止，已經(jīng)開發(fā)了幾種用于酪氨酸酶測定的熒光探針，而它們中的大多數(shù)遭受各種反應(yīng)氧（ROS）的干擾，例如HOCl，H₂O₂和ONOO^-。 因此，迫切需要開發(fā)一種能夠克服上述缺點的新型熒光探針。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一個目的是提供一種檢測Tyr的熒光探針。

本發(fā)明第二個目的是提供一種檢測Tyr的熒光探針的制備方法。

本發(fā)明第三個目的是提供一種檢測Tyr的熒光探針在檢測細(xì)胞內(nèi)Tyr的應(yīng)用。

本發(fā)明第四個目的是提供一種檢測Tyr的熒光探針在檢測斑馬魚體內(nèi)Tyr的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種檢測酪氨酸酶（Tyr）的熒光探針是由熒光染料FT-OH和間羥基芐溴制得。用于體外和體內(nèi)特異性監(jiān)測Tyr，并成功應(yīng)用于活細(xì)胞內(nèi)痕量Tyr的實時監(jiān)測。

所述熒光探針和化合物FL-O-T結(jié)構(gòu)通式如下：

其中R₁、R₂、R₃為氫、烷基或其他常見取代基。

化合物FL-O-T可作為檢測酪氨酸酶的熒光探針，該化合物FL-O-T通過熒光素類衍生物與間羥基芐溴經(jīng)親核取代反應(yīng)合成。

所述化合物FT-OH和FL-O-T，具有結(jié)構(gòu)如下：

其中R₁、R₂、R₃為氫、烷基或其他常見取代基。

化合物FL-O-T可作為檢測酪氨酸酶的熒光探針，該化合物FL-O-T通過熒光素類衍生物與間羥基芐溴經(jīng)親核取代反應(yīng)合成。

根據(jù)本發(fā)明所述檢測酪氨酸酶（Tyr）的熒光探針具有高化學(xué)選擇性和優(yōu)異的噪聲比信號等特點。