[發明專利]一種單克隆抗體ZKns2E11及其應用

有效

• 申請號: 201811519065.1
• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109503712B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 庾蕾;尹熾標;張復春
• 申請（專利權）人: 廣州市第八人民醫院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14;G01N33/569
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 徐翔

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種單克隆抗體ZKns2E11及其應用。本發明提供的單克隆抗體ZKns2E11是一種針對寨卡病毒NS1蛋白的全人源單克隆抗體，包括具有如SEQ ID NO.1所述氨基酸序列的重鏈可變區域和如SEQ ID NO.2所述氨基酸序列的輕鏈可變區域。本發明提供的單克隆抗體ZKns2E11中的重鏈和輕鏈是自然配對，故抗體的親和力高，與寨卡病毒NS1蛋白特異性結合，不與登革病毒NS1交叉，可以作為診斷或治療性抗體。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種單克隆抗體ZKns2E11及其應用。

背景技術

2015年至2016年寨卡病毒(ZIKV)在世界范圍尤其是美洲地區迅速傳播， 因其可導致嚴重的出生缺陷及成人神經系統并發癥，已被WHO宣布為國際公共 衛生緊急事件。

ZIKV同樣經伊蚊傳播，常出現在登革病毒(DENV)流行區。ZIKV與DENV 常出現在同一地區，但臨床特征、危害及處置不同。急需盡早區別這兩種病毒感 染，尤其是對懷孕的婦女而言。ZIKV和DENV同屬黃病毒，親緣關系相近。由 于基因組和蛋白質序列及構象上的相似所導致的交叉反應，為區分這兩種病毒感 染帶來了困難。

血清多克隆抗體及從感染者分離的單抗研究表明，ZIKV誘導宿主產生的針 對病毒膜蛋白E抗體存在廣泛的交叉反應。而針對病毒非結構蛋白1(NS1)的 抗體呈現高度特異性反應，為鑒別這兩種病毒感染提供了可能。Balmaseda等 (2017年)用從ZIKV感染者分離僅結合ZIKV NS1單抗，建立了基于NS1的 競爭ELISA法，用于ZIKV感染診斷，并區別其它黃病毒如登革4個血清型、 西尼羅病毒及黃熱病毒。

目前，針對ZIKV尚無有效的疫苗，更缺乏早期診斷及有效的治療方法。 NS1蛋白在黃病毒生命周期中起著重要作用，包括病毒復制、免疫逃逸以及在致 病機制中的作用。已明確NS1在登革熱發病機制中起著重要作用，與疾病的嚴 重性相關。因此針對寨卡病毒NS1蛋白的全人單抗可能成為寨卡病毒病治療的 一種策略。

單抗的制備技術經歷了鼠源抗體的雜交瘤技術、鼠人嵌合抗體、鼠抗體人源 技術、繼而出現人單抗制備技術。目前可用于大規模特異性抗體篩選的主要為噬 菌體展示技術及單個B細胞抗體技術。噬菌體展示技術可用于篩選分離針對任 何靶抗原的抗體。然而從隨機組合抗體的重鏈及輕鏈庫中篩選出的特異性抗體， 其重鏈和輕鏈配對不是自然產生抗體原有的，影響抗體的親和力和功能。單個B 細胞抗體技術直接從單個B細胞擴增抗體重鏈和輕鏈的可變區基因，構建抗體 表達質粒，繼而在細胞培養體系中表達抗體。這種技術可分離主要存在感染者體 內構象特異的功能性抗體。

中國專利申請CN107188935A公開了一種寨卡病毒NS1抗原突變體及其應 用，該抗原突變體通過對同源性高的片段進行基因敲除突變，然后經基因合成， 載體構建，原核表達，抗原純化及免疫學功能性分析篩選獲得，具有降低登革陽 性樣本檢出率的作用。但是，這種抗原突變體突變率低，只是降低了寨卡病毒與 登革病毒抗體檢測的交叉，無法根除。

綜上可知，現有技術中存在特異性低，無法徹底區分寨卡病毒與登革病毒， 篩選過程繁瑣等缺點。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的缺點與不足，提供一種單克隆抗體ZKns2E11及其應用。本發明提供的單克隆抗體ZKns2E11具有親和力高，可用 于區別寨卡病毒和登革病毒感染的優點。

目前，針對寨卡病毒病這一新發感染性疾病尚無有效的疫苗，更缺乏早期診 斷及有效的治療方法。本發明通過對有限數目記憶B細胞的培養，篩選并獲得 抗體重鏈和輕鏈的可變區基因，構建抗體表達載體，繼而在細胞培養體系中表達 抗體。本方法適用于構建全人源單克隆抗體。

為了達到上述目的，本發明提供了一種單克隆抗體ZKns2E11，包括重鏈和 輕鏈，所述重鏈可變區域的氨基酸序列信息如SEQ ID NO.1所示；所述輕鏈的 可變區域的氨基酸序列信息如SEQ ID NO.2所示；