[發明專利]一種提高腫瘤滲透滯留效應的功能化氧化石墨烯藥物復合物的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201811518331.9
• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109432441A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 侯琳;張振中;閆瑩珊;田春雨;張紅嶺;劉延龍;陳丹丹
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/64;A61K45/00;A61K47/52;A61K41/00;A61P35/00;A61K31/704;A61K31/337;A61K31/7068;A61K31/555
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 胡雨薇

1.一種提高腫瘤滲透滯留效應的功能化氧化石墨烯藥物復合物的制備方法，其特征在于，將氧化石墨烯與氫氧化鈉和氯乙酸反應形成羧基化的氧化石墨烯，通過酰胺化反應在聚乙二醇的一端分別修飾多肽鏈和2-氰基-6-氨基-苯并噻唑，再通過酰胺化反應將修飾過的聚乙二醇連接在羧基化的氧化石墨烯上形成混合給藥系統，最后通過π-π吸附負載抗癌藥物；具體包括以下步驟：

（1）制備羧基化氧化石墨烯：取氧化石墨烯 5-10mg溶于5ml超純水中，加入氫氧化鈉0.6-1.2g，氯乙酸0.5-1.0g，冰浴探超3h；加入濃鹽酸調節pH為6.5-7.5，用MWCO為3500的透析袋透析2天，得羧基化氧化石墨烯水溶液；

（2）制備多肽鏈修飾的聚乙二醇：稱取NH₂-PEG-COOH 8-10mg溶于2-5mL 溶劑中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽2-5mg，N-羥基琥珀酰亞胺1-3mg，室溫反應15-30min；加入多肽鏈1-3mg，室溫反應12-24h，用MWCO為1000的透析袋透析2天，得多肽鏈修飾的聚乙二醇；

所述的多肽鏈為含有Cys-Asn-Ala-Ala序列的多肽鏈；

所述溶劑為超純水，pH=7.4的PBS緩沖液，pH=5.6的MES緩沖液，無水乙醇，DMSO或甲酰胺的一種；

（3）制備2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的聚乙二醇：稱取NH₂-PEG-COOH 8-10mg溶于2-5mL 溶劑中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽2-5 mg，N-羥基琥珀酰亞胺1-3 mg，室溫反應15-30min，加入CABT 0.2-0.5mg，室溫反應12-24h，用MWCO為1000的透析袋透析2天，得2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的聚乙二醇；

所述溶劑為超純水，pH=7.4的PBS緩沖液，pH=5.6的MES緩沖液，無水乙醇，DMSO或甲酰胺的一種；

（4）制備多肽鏈修飾的氧化石墨烯：取步驟（1）制備的羧基化氧化石墨烯水溶液1-5mL，加入步驟（2）制備的多肽鏈修飾的聚乙二醇 5-10mg，冰浴探超5min，加入1-5mg EDC，繼續冰浴探超25min，再加入1-5mg EDC，室溫攪拌24h，用MWCO為10000的透析袋透析2天，得多肽鏈修飾的氧化石墨烯；

（5）制備2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的氧化石墨烯：取步驟（1）制備的羧基化氧化石墨烯水溶液1-5mL，加入步驟（3）制備的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的聚乙二醇5-10mg，冰浴探超5min，加入1-5mg EDC，繼續冰浴探超25min，再加入1-5mg EDC，室溫攪拌24h，用MWCO為10000的透析袋透析2天，得2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的氧化石墨烯；

（6）制備負載抗癌藥物的復合納米藥物：取步驟（4）制備的多肽鏈修飾的氧化石墨烯2-5mg和步驟（5）制備的2-氰基-6-氨基-苯并噻唑修飾的氧化石墨烯2-5mg溶于2-5mL超純水中，取抗癌藥物 2-5mg溶于0.2-0.5mL的溶劑中，逐滴加入功能化的氧化石墨烯水溶液中，冰浴探超1-3min，室溫攪拌12-24h，1000-3000rmp離心5-10min，取上清液與MWCO為1000的透析袋中透析4h，產物進行冷凍干燥，得提高腫瘤滲透滯留效應的功能化氧化石墨烯藥物復合物；

所述抗癌藥物為阿霉素、紫杉醇、吉西他濱或奧沙利鉑中的一種；

所述溶劑為超純水，pH=7.4的PBS緩沖液，pH=5.6的MES緩沖液，無水乙醇，DMSO或甲酰胺的一種。