[發(fā)明專利]一種磁微?；瘜W(xué)發(fā)光產(chǎn)品的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811518117.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN109444401A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王慧敏;王玉堂;李思雨;李林;付光宇;吳學(xué)煒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531;G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發(fā)明公開了一種磁微?；瘜W(xué)發(fā)光產(chǎn)品的制備方法，首先將磁珠原液加入到緩沖溶液中，混勻后磁鐵分離，棄上清備用；用緩沖溶液配制多聚糖溶液，加入高碘酸鈉進(jìn)行反應(yīng)；待反應(yīng)結(jié)束，加入EDC溶液和NHS溶液，混合均勻后將第一步洗滌過(guò)的磁珠加入，繼續(xù)反應(yīng)；將反應(yīng)溶液進(jìn)行磁鐵分離，棄上清后加入緩沖溶液對(duì)磁珠進(jìn)行洗滌；在洗滌后的磁珠中加入緩沖溶液和包被活材，混勻反應(yīng)；磁鐵分離棄除上清后，加入封保液振蕩反應(yīng)；磁鐵分離后，將磁珠定容到磁珠封保液中，制備工作完成，2~8℃保存。本發(fā)明方法修飾的磁珠表面的羧基密度高，活性位點(diǎn)較多，并且羧基活性高、偶聯(lián)效率高、抗原抗體包被量多，能夠有效提高磁珠分散性、靈敏度和檢測(cè)范圍。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷試劑，尤其是涉及一種磁微粒化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品的制備方法。

背景技術(shù)

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光產(chǎn)品（磁性微球）是基于化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)開發(fā)的一類體外診斷試劑，具有檢測(cè)超微量活性物質(zhì)的功能。羧基和氨基是兩種常用的修飾磁性微球的活性基團(tuán)。一定條件下，通過(guò)中間體活化，可與抗體或抗原上的氨基或羧基偶聯(lián)。其中，氨基修飾的磁性微球表面的氨基活性較好，很容易與抗體或抗原進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)。在使用戊二醛過(guò)程中，戊二醛作為空間臂對(duì)磁珠表面的氨基和抗體或抗原表面的氨基進(jìn)行偶聯(lián)，可獲得很高的包被量。但該方法活化階段常常生成不穩(wěn)定的席夫堿，還需要添加還原劑如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉，這常常會(huì)引起蛋白等變形失活，同時(shí)戊二醛也會(huì)導(dǎo)致磁珠和抗體或抗原發(fā)生自身交聯(lián)，導(dǎo)致磁珠、蛋白內(nèi)部交聯(lián)，不利于抗原抗體的包被。

目前，國(guó)內(nèi)的納米微球修飾技術(shù)也在逐步展開，也就是說(shuō)在納米微球表面包覆涂層，經(jīng)過(guò)修飾、改性磁珠表面的功能和性質(zhì)，然后進(jìn)行偶聯(lián)抗原抗體。

常見的包覆涂層有二氧化硅，但二氧化硅修飾常常引入新的問(wèn)題，二氧化硅本山帶有負(fù)電荷，常常會(huì)吸附帶正電荷的蛋白產(chǎn)生非特異性吸附。多糖類修飾磁珠，可顯著改善磁珠的生物相容性，改善磁珠的親水性，其表面的羥基可做進(jìn)一步的修飾，如瓊脂糖、葡聚糖等等，越來(lái)越受到更多人的青睞。

目前，在磁微粒包被CA199單克隆抗體的工藝中，羧基磁珠經(jīng)過(guò)EDC、NHS活化并與CA199單克隆抗體進(jìn)行連接，直接使用封保液進(jìn)行封閉和保存，該工藝表現(xiàn)為磁珠包被CA199單克隆抗體的效價(jià)較低，且磁珠分散性、靈敏度和檢測(cè)范圍較差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種磁微粒化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品的制備方法，該方法利用多聚糖對(duì)磁珠進(jìn)行修飾，可顯著改善磁微粒的抗板結(jié)能力，進(jìn)而可大大提升磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒的檢測(cè)范圍。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的磁微粒化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品的制備方法包括下述具體步驟：

第一步，將磁珠原液加入到緩沖溶液中，混勻后磁鐵分離，棄上清備用；

第二步，用緩沖溶液配制多聚糖溶液，加入高碘酸鈉進(jìn)行反應(yīng)；

第三步，待第二步反應(yīng)結(jié)束，加入EDC溶液和NHS溶液，混合均勻后將第一步洗滌過(guò)的磁珠加入，繼續(xù)反應(yīng)；

第四步，將第三步的反應(yīng)溶液進(jìn)行磁鐵分離，棄上清后加入緩沖溶液對(duì)磁珠進(jìn)行洗滌；

第五步，在第四步洗滌后的磁珠中加入緩沖溶液和包被活材，混勻反應(yīng)；

第六步，磁鐵分離棄除上清后，加入封保液振蕩反應(yīng)；

第七步，磁鐵分離后，將磁珠定容到磁珠封保液中，制備工作完成，2~8℃保存。

本發(fā)明所用緩沖溶液為磷酸鹽、碳酸鹽、嗎啉乙磺酸、DMF、DMSO、甲醇、乙醇溶液中的一種。

本發(fā)明所用多聚糖溶液的濃度為0.5~5%；其中多聚糖為葡聚糖、果糖、纖維素、透明質(zhì)酸、殼聚糖中的一種。