[發明專利]一種原生質微創傷外部導入活細胞的方法

在審

• 申請號: 201811516610.1
• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109468309A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 胡愛生;胡心宇
• 申請（專利權）人: 懷化市共生農業系統工程研究所(普通合伙)
• 主分類號: C12N15/05
• 分類號: C12N15/05
• 代理公司: 深圳市興科達知識產權代理有限公司 44260
• 代理人: 任曉

本發明公開了一種原生質微創傷外部導入活細胞的方法，包括如下步驟：使用獲得植物體作為目標材料，對目標材料造成創傷；獲得外源原生質組織液，然后將目標材料浸泡到外源原生質組織液中；取浸泡后成活的目標材料種植，篩選出外源原生質與目標材料雜交成功的材料即為目標材料。本發明通過導入外源原生質可跨越巨大的親緣關系距離，實現遠緣無性雜交育種的目的。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種原生質微創傷外部導入活細胞的方法。

背景技術

現有的植物雜交技術，具有成本高、效率低、操作復雜、見效慢、不能大批量處理材料，受到各種導入通道的特異性限制，具有遠源雜交不親和等現象。

發明內容

為了克服以上問題，本發明提供了一種原生質微創傷外部導入活細胞的方法。本發明通過導入外源原生質可跨越巨大的親緣關系距離，實現遠緣無性雜交育種的目的。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:

一種原生質微創傷外部導入活細胞的方法，包括如下步驟：使用獲得植物體作為目標材料，對目標材料造成創傷；獲得外源原生質組織液，然后將目標材料浸泡到外源原生質組織液中；取浸泡后成活的目標材料種植，篩選出外源原生質與目標材料雜交成功的材料即為目標材料。

進一步的改進，通過施加高濃度溶液、生化溶液腐蝕、或不利環境手段對目標材料造成創傷。

進一步的改進，原生質組織液通過對生物組織進行搗汁、壓濾后獲得。

進一步的改進，還對原生質組織液進行濃縮。

進一步的改進，所述濃縮的方法為低溫干燥濃縮。

進一步的改進，所述目標材料為種子，調整外源原生質組織液使得種子浸泡外源原生質組織液后成活率達到50％。

進一步的改進，使用外源原生質組織液浸泡目標材料30min-24h后，清洗目標材料，外部的外源原生質組織液。

進一步的改進，被接種的外源原生質組織液作為第一外源原生質組織液；然后選擇另一種植物的原生質組織液作為第二外源原生質組織液；第二外源原生質組織液與目標材料的親緣關系大于第一外源原生質組織液與目標材料的親緣關系；將第一外源原生質組織液與第二外源原生質組織液混合后再浸泡目標材料。

進一步的改進，所述外源原生質組織液包括細胞質成份、細胞核心成份和細胞器。

具體實施方式

下面結合具體實施例＝對本發明做進一步闡述和說明:

通過將環境脫水的生物組織進行搗汁、壓濾獲得外源原生質組織液，或者通過低溫低壓濃縮得來的濃縮液，或者原汁(未進行濃縮的)細胞漿液來包圍、浸泡生物組織、種子，同時采用施加濃度、生化、不利環境等手段、使目標材料導致局部創傷，創傷指標以種子作為被導入材料為例，將有一部分種子非正常死亡，此為創傷導入發揮了作用的依據。非正常死亡的檢測依據是發芽率與正常條件下的發芽率低，極限情況下可能造成99.9種子的死亡，在批量處理種子時，我們采用50％左右種子死亡為合理值。極限情況下可導致全部種子死亡歌者假死，通過移去損傷條件，優化外部環境，以及一切有益于搶救種子，使其復活，這個過程可能延長到30天或者更長，則導入外源物質的量被加大，成活下來的種可能產生更大的變異。

這種操作，對于親緣關系遠是一個擴大創傷、加劇創傷的因素。例于用親緣關系很遠的革命草(空心蓮子草，莧科蓮子草屬)搗汁壓濾液浸泡水稻種子，會造成很大的對水稻種子的殺傷力。當采用水稻搗汁壓濾液浸泡水稻種子時，可以提高水稻原生質導入目標細胞的效果，此時可以混入空心蓮子草的原生質實現空心蓮子草的原生質的導入。