[發(fā)明專利]自噬調(diào)節(jié)劑在消除牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)金黃色葡萄球菌中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811504688.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN109350618B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建柱;劉永夏;耿娜;李克鑫;李克欽;鄧干臻;王曉舟;劉康平;王潤(rùn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/4706
• 分類號(hào): A61K31/4706;A61P15/14;A61P31/04
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發(fā)明公開了自噬調(diào)節(jié)劑在消除牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)金黃色葡萄球菌中的應(yīng)用。本發(fā)明首次對(duì)金黃色葡萄球菌與牛乳腺上皮細(xì)胞自噬之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌能夠誘導(dǎo)牛乳腺上皮細(xì)胞自噬，但不能被自噬清除。因此，清除侵入牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)的金黃色葡萄球菌極為困難。本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)，自噬調(diào)節(jié)劑??氯喹(CHQ)能夠在自噬后期使牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)的金黃色葡萄球菌數(shù)量大幅降低，因此，CHQ可以被開發(fā)成為清除牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)的金黃色葡萄球菌的藥物，以及治療牛乳腺炎的藥物，具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥用途領(lǐng)域，具體涉及自噬調(diào)節(jié)劑在消除牛乳腺上皮細(xì)胞內(nèi)金黃色葡萄球菌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

牛乳腺炎是乳制品行業(yè)中非常普遍的疾病，并且在世界上許多國(guó)家和地區(qū)造成了相當(dāng)大的損失(Tollersrud et al.,2000)。細(xì)菌，真菌，支原體和藻類等多種生物被認(rèn)為是乳腺炎的病原體(Batavani et al.,2007)，其中細(xì)菌是最主要的病原(Stuhr andAulrich,2010)。根據(jù)各病原體的特征，乳腺炎病原體可分為傳染性和環(huán)境性的(Merrimanet al.,2014)。

金黃色葡萄球菌被認(rèn)為是乳腺炎最主要的傳染性病原體之一(Francoz et al.,2012)。它能在乳腺內(nèi)存活和繁殖，并能引起持續(xù)性感染，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致牛間傳播。持續(xù)性的乳房?jī)?nèi)感染一般表現(xiàn)為體細(xì)胞計(jì)數(shù)的長(zhǎng)期增加和臨床病例的反復(fù)出現(xiàn)，導(dǎo)致金黃色葡萄球菌性乳房炎變得更難以從牛群中消除(Scaccabarozzi et al.,2011).之前研究表明金黃色葡萄球菌可以入侵乳腺上皮細(xì)胞(BMECs)，從而逃避免疫防御機(jī)制并從BMECs中存活(Mestre et al.,2010；Schnaith et al.,2007；Sinha and Fraunholz,2010)。

自噬是一種高度保守的機(jī)制，通過去除受損的細(xì)胞器和胞質(zhì)蛋白來維持體內(nèi)平衡(Ktistakis and Tooze,2016)。過程可以提供必要的營(yíng)養(yǎng)物和大分子以應(yīng)對(duì)饑餓。除此之外，自噬也可以在許多條件下觸發(fā)，包括氧化應(yīng)激，缺氧和輻射(Kim et al.,2018)。到目前為止，已經(jīng)描述了三種類型的自噬，巨自噬，微自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬。(Sato et al.,2016)。其中，巨自噬涉及細(xì)胞內(nèi)組分的隔離(Morissette et al.,2010)，例如蛋白質(zhì)聚集體，細(xì)胞器，以及病原體。然后攜帶載體的囊泡(自噬體)與溶酶體融合以降解和循環(huán)利用。近年來，大量研究表明細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌也可以通過稱為食糜的過程被自噬靶向降解。(Bah andVergne,2017)。細(xì)胞溶質(zhì)以及液泡細(xì)菌可被自噬機(jī)器識(shí)別和捕獲，從而最終靶向溶酶體。

自噬受一系列信號(hào)通路和超過30種關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(自噬相關(guān)基因(Atgs))調(diào)控(Mizushima et al.,2008；Ravikumar et al.,2010)。PI3K/Akt和ERK1/2信號(hào)通路已被證實(shí)參與調(diào)節(jié)自噬以響應(yīng)于胞內(nèi)病原體(Shinojima et al.,2007)。SQSTM1/p62的泛素相關(guān)(UBA)結(jié)構(gòu)域可以將泛素化的貨物結(jié)合起來并將復(fù)合物引入囊泡。微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3)被鑒定為哺乳動(dòng)物中的自噬體特異性膜制造者。當(dāng)自噬進(jìn)行時(shí)，LC3通過LC3相互作用區(qū)域(LIR)識(shí)別，并且磷脂酰乙醇胺共價(jià)結(jié)合至脂質(zhì)-LC3(Kobayashi et al.,2010)。然后膜延伸，融合并形成閉合的雙膜囊泡。隨后，與溶酶體融合的自噬體和貨物降解(Kabeya etal.,2000；Kabeya et al.,2004)。

先前的研究報(bào)道了由許多細(xì)胞內(nèi)病原體引起的自噬特征，例如弗氏志賀氏菌，流產(chǎn)布魯氏菌，伯氏瘧原蟲，嗜肺軍團(tuán)菌和牙齦卟啉單胞菌等。(Ogawa and Sasakawa,2006；Rodrigues et al.,2008).作為乳腺的重要屏障，乳腺上皮細(xì)胞在維持上皮細(xì)胞完整性和抵抗感染方面發(fā)揮著重要作用，但尚未探索如何通過自噬對(duì)金黃色葡萄球菌感染作出反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容