[發明專利]水蛭特異性營養誘導液及天然水蛭素的提取方法

在審

• 申請號: 201811502139.0
• 申請日: 2018-12-10
• 公開（公告）號: CN109527270A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 許維岸;盧天才;韓宏巖;郭桃桃;李陽
• 申請（專利權）人: 蘇州大學;廣西金邊菲牛蛭養殖有限公司
• 主分類號: A23K50/80
• 分類號: A23K50/80;A23K20/22;A23K20/142;A23K20/163;A23K20/121;A01K61/40;C07K14/815;C07K1/30;C07K1/14
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

本發明涉及生物技術領域，特別涉及水蛭特異性營養誘導液及天然水蛭素的提取方法。該水蛭特異性營養誘導液包括氯化鈉、復合氨基酸、葡萄糖、反式?4,5?環氧基?2?癸烯醛和無菌水。本發明采用活體誘導喂飽菲牛蛭的方法，避免了水蛭大規模的采殺，使水蛭得到重復利用。采用喂食特異性營養誘導液代替全牛血和其它適口性差的誘導物質，既能誘導水蛭充分吸食，又減少了大量血液等雜蛋白混入，有利于后續天然水蛭素分離和純化。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及水蛭特異性營養誘導液及天然水蛭素的提取方法。

背景技術

水蛭俗稱螞蟥、馬鱉等，在動物分類學上隸屬于環節動物門、蛭綱的種類。目前世界上估計約有500種，在我國有100種左右，業已發現89種。水蛭根據其食性可以分為吸血和不吸血兩大類。目前國際上將吸食哺乳動物或者其它脊椎動物血液的吸血水蛭統稱為醫用水蛭。

菲牛蛭(Poecilobdella manillensis Lesson)俗稱金邊螞蟥，隸屬于環節動物門、蛭綱、無吻蛭目、醫蛭科、牛蛭屬。在吸血類水蛭中，菲牛蛭是一個體型較大的種類，在我國主要分布于我國華南的廣西、廣東、福建、海南和香港等地低于海拔500m的廣大地區。通常生活在稻田、水溝、江河或池塘里，主要以吸吮人和脊椎動物(如牛、青蛙等)的血液為生。

1884年威爾士國家醫學院海克拉夫特首先發現吸血水蛭咽部具有水溶性抗凝血物質。1904年雅各比將這種物質命名為“水蛭素”(Hirudin)。1955年德國馬克沃德特首次從吸血水蛭體內分離提取出較純的水蛭素。科學研究表明，菲牛蛭體內含有豐富的抗凝血酶活性物質即天然水蛭素，它是迄今為止世界上所發現作用最強的天然抗凝血酶物質，對人類心腦血管疾病尤其是腦血栓等疾病具有較好的療效。

近一個世紀以來，各國學者對吸血水蛭的唾液腺分泌物進行廣泛而又深入研究。現代醫學科學和藥理學研究表明，吸血水蛭在吸吮血液過程中能夠分泌大量的唾液，其唾液中含有許多生物活性成分，主要包括：(1)含有直接作用于凝血系統的成分，如水蛭素等。(2)含有類似于嗎啡類的生物鎮痛及消炎成分。(3)含有抑制各種細菌生長的抗生素物質(如金黃色葡萄球菌等)。(4)含有能促使傷口愈合并減少疤痕形成的成分，如水蛭透明質酸酶類物質等。各國科學家還在吸血水蛭唾液腺分泌物中發現了許多與吸食哺乳動物血液相關聯的生物活性物質，如麻醉劑(Anaesthetic)、血管擴張劑(Vasodilator)、裂纖酶(Hementin)、前列腺素(Prostaglandins)以及安替斯塔辛(Antistasin)、博待啉(Bdellins)和伊格啉(Eglins)等其它蛋白酶抑制劑。天然水蛭素是迄今為止世界上所發現作用最強的抗凝血酶物質，其在治療某些血液性疾病方面優于肝素和其它凝血酶抑制劑，能夠更有效地抑制凝血酶誘發的彌散性血管內凝血和靜脈血栓形成，在治療諸如敗血休克、動脈粥樣硬化、腦血管梗塞、心血管病、眼科以及遺傳性疾病等缺少抗凝血酶Ⅲ的病例方面顯示出巨大的優越性，從而引起各國醫藥工作者的廣泛重視。因此，各國生物學科研工作者對水蛭素的純化產生極大興趣，也嘗試了很多分離純化的方法。目前，現有國內有關天然水蛭素分離提取方法如下：

1、以水蛭組織為原料直接提取方法。這些方法主要是將水蛭或者局部組織搗碎成漿狀，采用高溫蒸煮法、雙水相沉淀法、有機溶劑沉淀法等等。此外還采用層析法(如凝膠層析、離子交換層析等)、等電聚焦等方法提取水蛭素。如“醫用天然水蛭素的提取方法”(CN92107076)；“一種天然水蛭素的生產方法”(CN 201110237485.6)；“一種以菲牛蛭唾液為原料的水蛭素生產工藝”(CN 92107076)；“動物血水蛭水解法及其水蛭水解血”(CN95105650.6)；“一種天然水蛭素有效成分的提取方法”(CN 200710066096.1)。最近研究發現：水蛭軀體組織中存在有大量的與水蛭素結構類似的“偽水蛭素”(Pseudo-hirudin)組分。“偽水蛭素”無生物活性，它的存在增加水蛭素分離的難度。除此之外，其它雜質(如組織液蛋白、動物血液等)含量過多，因此分離工藝復雜、生產周期長、提取率低、成本過高而在實際中無法采用。