[發(fā)明專利]一種α-1;2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶及其在奶粉中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811496691.3
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN109337883A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙超;李?yuàn)檴?/a>;王瑩;劉丹;鐘汝婷;袁思男
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/04;C12P19/12;C12P19/00;C12R1/19
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，其特征在于，所述的糖基轉(zhuǎn)移酶氨基酸如SEQ ID NO.2所示。

2. 一種編碼權(quán)利要求1所述α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸如SEQ ID NO.1所示。

3.一種如權(quán)利要求2所述基因的制備方法，其特征在于，設(shè)計(jì)基因擴(kuò)增引物，上游引物為：GTATACTAGTAGCAAGCA，下游引物為：GGATCCTTACAGCACGGTCCAACC；然后以嗜熱聚球藻Thermosynechococcus sp. NK55a基因組DNA為模板，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行基因擴(kuò)增，獲得α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因序列。

4.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述載體包含權(quán)利要求2所述的α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的核苷酸序列。

5.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞中獲得。

6.一種如權(quán)利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將權(quán)利要求5所述基因工程菌接種至培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的誘導(dǎo)下表達(dá)α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶，并采用咪唑梯度洗脫的方法純化所述的α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶。

7. 如權(quán)利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶在制備α-1,2-巖藻糖基化寡糖中的應(yīng)用，其特征在于：制備方法如下：利用權(quán)利要求5所述的基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提供GDP-巖藻糖供體底物以及包括單糖或寡糖的受體底物，通過生物酶法合成體系催化巖藻糖殘基從所述供體底物轉(zhuǎn)移到所述受體底物，由此獲得α-1, 2-巖藻糖基化寡糖，所述寡糖包含以下各項(xiàng)的一種或多種：Lacto-N-tetraose、Lacto-N-neotetraose、Galβ1,3GalNAcαProN₃、Galβ1,3GalNAcβProN₃、Galβ1,3GlcNAcαProN₃、Galβ1,3GlcNAcβProN₃、乳糖、乳果糖、D-半乳糖、β-芐基乳糖，以及Galβ1,3-為起始的寡糖。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述GDP-巖藻糖通過在宿主細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)的酶或通過宿主細(xì)胞的代謝而提供。

9.利用權(quán)利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶制備α-1,2-巖藻糖基化寡糖在嬰幼兒奶粉中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述嬰幼兒奶粉，由以下重量百分比的物料組成：α-1,2-巖藻糖基化寡糖0.01-5%、脫脂乳粉10-30%、脫鹽乳清粉20-45%、乳糖15-30%、植物油10-30%、濃縮乳清蛋白粉2-10%、低聚半乳糖1-5%、低聚果糖1-5%、膳食纖維0.1-6%、礦物質(zhì)預(yù)混料0.8-1.5%、花生四烯酸0.3-1.8%、二十二碳六烯酸0.2-1.0%、維生素預(yù)混料0.1-0.3%、酪蛋白磷酸肽0.10-0.22%、乳鐵蛋白0.02-0.1%、L-酪氨酸0.02-0.09%、L-抗壞血酸鈉0.03-0.12%、核苷酸0.018-0.05%、L-色氨酸0.01-0.05%、L-蛋氨酸0.01-0.05%、牛磺酸0.01-0.04%，以上原料之和為百分之百。