[發明專利]一種α-1;2-巖藻糖基轉移酶及其在奶粉中的應用

在審

• 申請號: 201811496691.3
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109337883A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 趙超;李姍姍;王瑩;劉丹;鐘汝婷;袁思男
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/04;C12P19/12;C12P19/00;C12R1/19
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種α-1,2-巖藻糖基轉移酶，其特征在于，所述的糖基轉移酶氨基酸如SEQ ID NO.2所示。

2. 一種編碼權利要求1所述α-1,2-巖藻糖基轉移酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸如SEQ ID NO.1所示。

3.一種如權利要求2所述基因的制備方法，其特征在于，設計基因擴增引物，上游引物為：GTATACTAGTAGCAAGCA，下游引物為：GGATCCTTACAGCACGGTCCAACC；然后以嗜熱聚球藻Thermosynechococcus sp. NK55a基因組DNA為模板，利用聚合酶鏈式反應進行基因擴增，獲得α-1,2-巖藻糖基轉移酶基因序列。

4.一種重組表達載體，其特征在于，所述載體包含權利要求2所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶基因的核苷酸序列。

5.一種基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由權利要求4所述的重組表達載體轉化至宿主細胞中獲得。

6.一種如權利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將權利要求5所述基因工程菌接種至培養基中培養，在異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的誘導下表達α-1,2-巖藻糖基轉移酶，并采用咪唑梯度洗脫的方法純化所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶。

7. 如權利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶在制備α-1,2-巖藻糖基化寡糖中的應用，其特征在于：制備方法如下：利用權利要求5所述的基因工程菌進行誘導表達，提供GDP-巖藻糖供體底物以及包括單糖或寡糖的受體底物，通過生物酶法合成體系催化巖藻糖殘基從所述供體底物轉移到所述受體底物，由此獲得α-1, 2-巖藻糖基化寡糖，所述寡糖包含以下各項的一種或多種：Lacto-N-tetraose、Lacto-N-neotetraose、Galβ1,3GalNAcαProN₃、Galβ1,3GalNAcβProN₃、Galβ1,3GlcNAcαProN₃、Galβ1,3GlcNAcβProN₃、乳糖、乳果糖、D-半乳糖、β-芐基乳糖，以及Galβ1,3-為起始的寡糖。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述GDP-巖藻糖通過在宿主細胞中同時表達的酶或通過宿主細胞的代謝而提供。

9.利用權利要求1所述的α-1,2-巖藻糖基轉移酶制備α-1,2-巖藻糖基化寡糖在嬰幼兒奶粉中的應用。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述嬰幼兒奶粉，由以下重量百分比的物料組成：α-1,2-巖藻糖基化寡糖0.01-5%、脫脂乳粉10-30%、脫鹽乳清粉20-45%、乳糖15-30%、植物油10-30%、濃縮乳清蛋白粉2-10%、低聚半乳糖1-5%、低聚果糖1-5%、膳食纖維0.1-6%、礦物質預混料0.8-1.5%、花生四烯酸0.3-1.8%、二十二碳六烯酸0.2-1.0%、維生素預混料0.1-0.3%、酪蛋白磷酸肽0.10-0.22%、乳鐵蛋白0.02-0.1%、L-酪氨酸0.02-0.09%、L-抗壞血酸鈉0.03-0.12%、核苷酸0.018-0.05%、L-色氨酸0.01-0.05%、L-蛋氨酸0.01-0.05%、牛磺酸0.01-0.04%，以上原料之和為百分之百。