[發(fā)明專利]鬼臼毒素的核酸適配體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811495682.2
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109536505B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設計）人: 姚冬生;謝碧瑤;冉國敬;謝春芳;劉大嶺
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N27/327
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

本發(fā)明涉及一種核酸適配體，特別涉及能與鬼臼毒素特異性結合的核酸適配體以及利用該核酸適配體制作成的電化學生物傳感器。本發(fā)明所述的鬼臼毒素的核酸適配體具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。核酸序列的5’端具有巰基修飾基團。本發(fā)明所述的鬼臼毒素核酸適配體對底物鬼臼毒素具有特異性親和力。本發(fā)明所述的核酸適配體組裝在電極上，能夠制成對鬼臼毒素響應靈敏的電化學生物傳感器以及用于檢測鬼臼毒素的試劑盒。本發(fā)明所述的核酸適配體具有分子量小、性質穩(wěn)定、成本低廉、易于保存等優(yōu)點，利用其制成的電化學生物傳感器可用于定性定量檢測鬼臼毒素，比傳統(tǒng)檢測方法更快速更靈敏更穩(wěn)定，大大提高檢測效率及成本。

技術領域

本發(fā)明涉及一種核酸適配體，特別涉及能與鬼臼毒素特異性結合的核酸適配體以及利用該核酸適配體制作成的電化學生物傳感器。

背景技術

鬼臼毒素(Podophyllotoxin,PPT)，化學名稱為5R-5,8,8a,9-四氫-9-羥-5-(3,4,5-三甲氧苯基)呋喃(3',4':6,7)萘并-[2,3-d]-1,3-間二氧雜環(huán)烯-6(5aH)-酮，分子式是C22H22O8，分子量大小是414.41Da。其熔點在114～118℃(泡沸)之間，其水合物熔點是114～118℃。干燥后其熔點是183.3～184.0℃，旋光度是-132.7°(氯仿)。23℃水中溶解度為120 mg/L，溶于乙醇、氯仿、丙酮、冰醋酸，熱溶于苯。

鬼臼毒素是從小蘗科鬼臼屬植物——華鬼臼(又稱雞苔素)的根和莖中提取到的木脂類抗腫瘤成份。為白色結晶性粉末，無嗅，有吸濕性。從華鬼臼中提取到的鬼臼毒素可以制成膏劑和酊劑。鬼臼毒素能有效抑制皰疹病毒，抑制細胞中期的有絲分裂，用于毒性性病。

鬼臼毒素針對尖銳濕疣、多發(fā)性淺表性上皮瘤病(如多發(fā)性淺表性或浸潤性基底細胞上皮瘤，鱗狀細胞上皮瘤和基底鱗狀細胞上皮瘤)，前上皮瘤性角化病，脂溢性角化、日光性角化和射線角化病，幼年喉頭乳頭瘤、疣(尋常疣、絲狀疣)有一定療效。

鬼臼毒素因其具有良好的藥用價值，逐漸成為了研究的熱點，以其為主要成分的藥物也越來越多。目前檢測鬼臼毒素的手段不多，主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜法(LC)、反相高效液相色譜(reveresed-phase HPLC)、色譜聯(lián)用技術LC/MS)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等。這些方法檢出限低、精密度高，但操作復雜、檢測成本高且不夠快速，故開發(fā)一種簡便的、價格低廉的、快速的檢測手段定性定量檢測藥物或其他物質中的鬼臼毒素成為了一種緊急的需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種鬼臼毒素的核酸適配體，該核酸適配體對底物鬼臼毒素具有特異性親和力，經(jīng)等溫滴定微量熱實驗表明，該核酸適配體可與鬼臼毒素進行特異性的結合。。

本發(fā)明所述的鬼臼毒素的核酸適配體具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。SEQID NO.1：

5’-GGTGGGCACGTGCCTTCCCCGCCGGTCTCGTGCCCTTCGCTAGG-3’。

根據(jù)本發(fā)明所述的鬼臼毒素的核酸適配體的進一步特征，所述核酸序列的5’端具有巰基修飾基團。

優(yōu)選的序列為：

5’-SHGGTGGGCACGTGCCTTCCCCGCCGGTCTCGTGCCCTTCGCTAGG-3’。

本發(fā)明的第二個目的在于提供一種電化學生物傳感器，它能實現(xiàn)對鬼臼毒素的高靈敏度、高選擇性的快速檢測。

本發(fā)明所述的電化學生物傳感器包括根據(jù)本發(fā)明所述的鬼臼毒素適配體。

根據(jù)本發(fā)明所述的電化學生物傳感器的進一步特征，所述鬼臼毒素的核酸適配體偶聯(lián)于絲網(wǎng)印刷電極表面。

本發(fā)明的第三個目的在于提供一種用于檢測鬼臼毒素的試劑盒。