[發明專利]水牛大片形吸蟲抗體的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201811495551.4
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109507420B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 吳文德;張為宇;侯林靜
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 韋莎

本發明公開了水牛大片形吸蟲抗體的快速檢測方法，屬于牛疫病檢測技術領域。本發明包括如下步驟：S1、抗水牛IgG單克隆抗體2G7金標抗體結合墊的制備；S2、檢測帶的制備，將羊抗鼠IgG抗體和大片形吸蟲ES抗原分別噴涂在硝酸纖維素膜上，作為C線和T線；S3、檢測條的裝配；S4、檢測及結果判定，通過檢測帶的顯色反應判斷為陽性或陰性。本發明具有檢測快速、操作簡便、易于判定、特異性強等優點，能夠為水牛大片形吸蟲的檢測提供實用有效的方法。本方法對檢測人員操作技術要求不高，且不需要特殊的儀器設備，適合在基層做推廣使用。

技術領域

本發明涉及牛疫病檢測技術領域，具體涉及水牛大片形吸蟲抗體的快速檢測方法。

背景技術

片形吸蟲(Fasciola spp)病是感染牛羊等反芻動物最重要的寄生蟲病之一，同時也是一種食源性人畜共患寄生蟲病。寄生在牛肝臟膽管中的大片形吸蟲，能引起急性或慢性的肝炎和膽管炎，并繼發全身性的中毒和營養障礙，常引起犢牛的大批死亡。牛的片形吸蟲病多呈慢性，臨床癥狀根據感染強度和牛的年齡、飼養管理條件、抵抗力等因素不同而有輕重不同表現。在輕度感染時，除了牛犢(1.5～2歲)有癥狀表現外，患畜常不表現癥狀，這使得此病在成年牛群中不易被發覺。但成年牛如果群體大量感染并且存在患畜體質較差的情況，也會出現強烈明顯的癥狀，甚至引起死亡。

廣西是我國的水牛之鄉，作為水牛養殖第一大省，廣西地區的水牛數量多達近500萬頭，受到水牛片形吸蟲的感染現況也十分嚴重。因此，能夠準確及時地檢測到大片形吸蟲病，不僅在提高生產性能、保護牲畜健康、減少經濟損失等方面意義重大，也對保護人類健康意義深遠。

目前針對水牛大片形吸蟲病的檢測，應用方法主要有聚合酶鏈式反應(PCR)、蟲卵檢測法、間接ELISA法等，但這些檢測方法存在對人員操作技術要求較高、需要特殊的儀器設備、以及耗時較長等原因，并不適合在基層做推廣使用。水牛大片形吸蟲病需要一種簡便、快速、特異、靈敏的檢測方法，便于在廣大基層進行臨床應用。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術存在的上述問題，提供水牛大片形吸蟲抗體的快速檢測方法，本方法具有檢測快速、操作簡便、易于判定、特異性強等優點，能夠為水牛大片形吸蟲的檢測提供實用有效的方法。本方法對檢測人員操作技術要求不高，且不需要特殊的儀器設備，適合在基層做推廣使用。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案如下：

水牛大片形吸蟲抗體的快速檢測方法，包括如下步驟：

S1、金標抗體結合墊的制備：

a、采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，膠體金的大小為40nm；

b、采用常規方法用膠體金溶液標記抗水牛IgG單克隆抗體2G7，得到金標抗體；

所述抗水牛IgG單克隆抗體2G7是由雜交瘤細胞株2G7分泌而得，所述雜交瘤細胞株2G7，保藏號為CCTCC NO：C2018236；

c、將金標抗體做2倍稀釋后噴涂在玻璃纖維膜上，37℃干燥后得到結合墊，于4℃密封保存，待用；

S2、檢測帶的制備：

a、取硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜上設置有質控線C和檢測線T，所述質控線C與檢測線T的距離為4-6mm；

b、將濃度為0.5-1.5mg/mL的羊抗鼠IgG抗體涂在硝酸纖維素膜的質控線C位置，將濃度為1-3mg/mL大片形吸蟲ES抗原涂在硝酸纖維素膜的檢測線T位置，得到檢測帶，待用；

S3、檢測條的裝配：

在硬質聚氯乙烯背襯上按順序粘貼如下部分：吸水紙I→結合墊→檢測帶→吸水紙II，以上各部分首尾互相銜接，得到檢測條；所述檢測帶上的檢測線T位于靠近結合墊一端，質控線C位于靠近吸水紙II一端；