[發(fā)明專利]煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811490869.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN109453260A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲;張武華;張時(shí)山;陳玉皎;聶開美;周澤潤;牛亞茹;王豐;耿召良;蘇賢坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州貴安精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究院股份有限公司;貴州省煙草科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A61K36/81
• 分類號(hào): A61K36/81;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用，其中方法包括：通過對(duì)煙草原料進(jìn)行超微粉碎，并針對(duì)超微粉碎后的煙草原料依次進(jìn)行常溫提取、高溫提取、甲醇提取、丙酮提取四次操作，且依次使用高極性溶劑純化水、甲醇、丙酮作為提取溶劑，取煙草丙酮提取物濃縮浸膏通過制備液相進(jìn)行色譜分離，獲得組分通過細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)篩選活性最強(qiáng)組分進(jìn)一步分離，再次通過細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)篩選得到的活性最強(qiáng)組分即為本發(fā)明目的組分。該方法重復(fù)性好，得到的抗腫瘤活性組分可用于制備抗腫瘤藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及煙草產(chǎn)品加工提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

煙草也稱仙草，是一味傳統(tǒng)的中藥材，它的無機(jī)成分包括水、礦質(zhì)元素；有機(jī)成分主要包括糖類、生物堿、雜環(huán)類、色素、酚類、萜類、有機(jī)酸類、脂質(zhì)類、醇類、醛酮類等。其中，煙草中有機(jī)成分具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化活性、清除體內(nèi)自由基等多種功能。

目前，為了實(shí)現(xiàn)對(duì)煙草活性組分的提取，一般采用超臨界提取、索氏提取、超聲波提取方式。采用無水乙醇、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷作為提取溶劑。其中低極性溶劑如石油醚、正己烷，中極性溶劑丙酮、二氯甲烷，這些溶劑多為易揮發(fā)、易燃、有毒溶劑，對(duì)工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備、人員等要求高，且得到的煙草活性組分的含量少，這就大大限制了煙草活性組分的進(jìn)一步研究和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用，以提高煙草活性組分的提取量。

第一方面，本發(fā)明提供了一種煙草活性組分的提取分離方法，該方法包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：對(duì)煙草原料進(jìn)行烘干處理，以及將烘干處理后的煙草原料進(jìn)行超微粉碎處理，得到煙草超微粉；

(2)常溫水提：在煙草超微粉中加入提取溶劑，在常溫條件下進(jìn)行提取操作；對(duì)提取操作后的煙草超微粉進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(2)中的提取溶劑為純化水；

(3)高溫水提：在步驟(2)中收集的沉淀物中加入提取溶劑，在90-100℃的提取溫度下進(jìn)行濃縮提取操作；對(duì)濃縮提取操作后得到的濃縮提取液進(jìn)行降溫處理、離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(3)中的提取溶劑為純化水；

(4)甲醇提?。涸诓襟E(3)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進(jìn)行浸提提取操作，對(duì)浸漬提取物進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮烘干處理；步驟(4)中的提取溶劑為85-100％的甲醇；

(5)丙酮提?。涸诓襟E(4)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進(jìn)行浸提提取操作，對(duì)浸漬提取物進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮烘干處理，得到煙草活性組分；步驟(5)中的提取溶劑為85-100％的丙酮；

(6)煙草活性組分分離：在步驟(5)中得到的上清液進(jìn)行濃縮烘干處理，配制樣品制備液相進(jìn)行分離，分離得到的組分進(jìn)行活性篩選，具有活性的組分再進(jìn)一步分離；

(7)在步驟(6)中得到的具有活性組分的樣品，制備液相進(jìn)行分離，分離得到的組分進(jìn)行活性篩選，選取活性最強(qiáng)的組分；

(8)質(zhì)譜分析：在步驟(7)中制備液相分離出來具有抗腫瘤活性的組分，質(zhì)譜進(jìn)樣，得到其所有可能性的結(jié)構(gòu)式。

優(yōu)選的，步驟(1)中的烘干處理是將煙草原料放置在烘箱中進(jìn)行烘干，使得烘干處理后的煙草原料的含水量小于5％，烘干溫度為50-60℃，烘制時(shí)間為4-8h；

和/或，步驟(1)中的超微粉碎處理是將烘干處理后的煙草原料，使用50-80目篩網(wǎng)的粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，并對(duì)粉碎處理后的煙草原料，使用200-400目篩網(wǎng)的粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎處理，得到所述煙草超微粉。