[發明專利]一種抗人TSLP單克隆抗體及其制備與應用

有效

• 申請號: 201811487449.X
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109678957B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 張彥璐;應國清;俞敬愛;易喻;陳建澍;梅建鳳
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N5/20;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/577;G01N33/574;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種抗人TSLP單克隆抗體及其制備與應用，所述抗人TSLP單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的CDR1、CDR2、CDR3互補決定區或其功能可變體；所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的CDR1、CDR2、CDR3互補決定區或其功能可變體；本發明成功制備了抗人TSLP單克隆抗體，該抗體特異性好，能夠與人TSLP特異性結合，結合率高，且廉價易得，可以大規模生產，十分有利于開發成為過敏性炎癥以及腫瘤免疫治療的潛在藥物。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，具體涉及一種抗人胸腺基質淋巴生成素單克隆抗體的制備方法，其可變區序列及其應用。

背景技術

雜交瘤技術(hybridoma technique)，又稱單克隆抗體技術，由Koehler和Milstein在1975年提出。利用骨髓瘤細胞在體外無限繁殖以及淋巴細胞分泌特異性抗體的特性，將兩種細胞融合，可形成針對特定抗原的高特異性單克隆抗體。

胸腺基質淋巴細胞生成素(thymine stromal lymphopoietin，TSLP)是一種IL-7樣，由四個螺旋束組成短鏈的I型細胞因子，主要由胸腺基質細胞和上皮細胞分泌，肥大細胞和巨噬細胞也能少量分泌。該細胞因子能通過對髓樣和淋巴樣細胞進行作用，從而平衡體內天然免疫和適應性免疫，在啟動及促進由Th2細胞介導的過敏性炎癥中扮演著重要的角色。此外，TSLP對乳腺癌，胰腺癌，宮頸癌，結直腸癌等都有一定的作用。目前，TSLP作為過敏性哮喘和其它過敏性疾病的新型治療靶向正逐漸成為可能。Gail等人發現使用TSLP單克隆抗體治療過敏性哮喘病人，能減輕支氣管收縮以及氣道炎癥反應。此外，動物實驗表明，阻斷TSLP/TSLPR信號可以抑制肺樹突狀細胞(DC)的功能，從而減輕小鼠過敏性氣道炎癥。

本發明前期通過構建人類TSLP基因的原核表達載體，并將重組載體轉入感受態大腸桿菌BL21(DE3)體內，成功構建了能良好表達人重組TSLP蛋白的工程菌(BL21-PET22b-Q1、BL21-PET30a-Q1)，經過誘導可體外表達出人類TSLP重組蛋白，實現了體外誘導表達該蛋白的技術途徑，并確定了最佳的誘導表達條件及蛋白純化及復性條件。在本發明中，采用工程菌(BL21-PET22b-Q1、BL21-PET30a-Q1)誘導表達并純化的重組人TSLP蛋白作為抗原，通過雜交瘤技術篩選制備得到高親和力的抗人TSLP特異性單克隆抗體，并通過體外實驗驗證其高效生物學活性，為治療過敏性炎癥和腫瘤疾病提供了新的思路。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗人TSLP單克隆抗體及其制備方法與應用，該抗體具有高效生物學活性，為治療過敏性炎癥和相關腫瘤疾病提供了新的思路。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供一種抗人TSLP單克隆抗體，所述抗人TSLP單克隆抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的CDR1、CDR2、CDR3互補決定區或其功能可變體；所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的CDR1、CDR2、CDR3互補決定區或其功能可變體；所述功能可變體是指與SEQ ID NO.1-6中任意一個氨基酸序列具有至少70％序列同源性的功能活性變體。

所述重鏈可變區的三個互補決定區序列分別為：

CDR1:Asn-Tyr-Gly-Met-Asn(SEQ ID NO.1)；

CDR2:Trp-Ile-Asn-Thr-Tyr-Thr-Gly-Glu-Pro-Thr-Tyr-Ala-Asp-Asp-Phe-Lys-Gly(SEQ ID NO.2)；