[發(fā)明專利]一種富硒組合物及制劑的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811485048.0
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN111281881A
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 聶威
• 申請（專利權）人: 聶威
• 主分類號: A61K33/04
• 分類號: A61K33/04;A61P35/00;A61P37/04;A23L33/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種富硒組合物及制劑的應用。具體是作為制備改善人體CD4+、CD8+的水平及提高CD4+/CD8+比值的藥品、保健食品、功能性普通食品、特殊醫(yī)學配方食品、特殊膳食食品的應用，屬于大健康應用技術領域。本發(fā)明選用對小鼠腹水型肝癌細胞H22的影響、柯薩奇B4和B3M病毒重疊感染對昆明鼠T細胞亞群的影響、對FLV感染小鼠的細胞免疫功能的影響幾項技術驗證，發(fā)現(xiàn)該富硒組合物及制劑具有顯著改善CD4+、CD8+的水平及提高CD4+/CD8+比值的效果。

技術領域

本發(fā)明涉及一種富硒組合物及制劑的應用。具體是作為制備改善人體CD4+、CD8+的水平及提高CD4+/CD8+比值的藥品、保健食品、功能性普通食品、特殊醫(yī)學配方食品、特殊膳食食品的應用，屬于大健康應用技術領域。

背景技術

T細胞是白血球細胞，在免疫系統(tǒng)中扮演很重要的角色。人體內(nèi)有兩種主要的T細胞，其中一種就稱為CD4細胞，CD4+T淋巴細胞是人體免疫系統(tǒng)中一種重要的免疫細胞---簡稱為CD4細胞。在T細胞的表面這些CD4細胞又稱為免疫系統(tǒng)的輔助手，能指揮身體對抗微生物，例如病毒。還可以看到一種CD8+T細胞，而這又是另一種T淋巴細胞，也稱之為細胞毒性T細胞，其功能就像一個“殺手”或細胞毒素，可以消滅受感染的細胞。測定CD4+、CD8+的水平及CD4+/CD8+比值可在一定程度上反映機體免疫功能。由于HIV的攻擊對象正是人體的CD4細胞，因此CD4記數(shù)能夠直接反映人體免疫功能，是提供HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀況最明確的指標。適量補硒不但可以提高免疫力，同時也能提高對一些病毒感染的抵抗力，并且可以使致病株的毒力下降而減輕病毒感染對心肌的損害；研究表明，飲食補硒后，人的外周血淋巴細胞或動物脾淋巴細胞對PHA、ConA或同種抗原的刺激應答顯著增強，細胞內(nèi)DNA合成增加，淋巴細胞增殖分化能力以及CD8+細胞毒T細胞數(shù)量增多，殺腫瘤細胞能力增強。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于開辟一種富硒組合物及制劑，其制備方法和應用的新用途。本發(fā)明的目的是采用以下技術方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明選用對小鼠腹水型肝癌細胞H22的影響、柯薩奇B4和B3M病毒重疊感染對昆明鼠T細胞亞群的影響、對FLV感染小鼠的細胞免疫功能的影響幾項技術驗證，發(fā)現(xiàn)該富硒組合物及制劑具有明顯改善CD4+、CD8+的水平及提高CD4+/CD8+比值的作用。

具體實施方式

實施例1：組合物料的制備富硒酵母：直接購置保健品營養(yǎng)素補充劑原料，經(jīng)檢測硒含量(以Se計)為0.07％。維生素C：直接購置食品級原料，經(jīng)檢測維生素C含量(以L-抗壞血酸計)為99.79％。乳糖、預膠化淀粉、硬脂酸鎂：直接購置食品級原料。

實施例2：富硒乳化物制備富硒乳化物按昆明朗盛生物科技有限公司《一種富硒組合物及制劑，其制備方法和應用》(申請?zhí)枺?01810104156.2)專利申請制備。經(jīng)檢測富硒乳化物中硒含量為0.018％。

實施例3：組合物制備取實施例2制備的富硒乳化物，按昆明朗盛生物科技有限公司《一種富硒組合物及制劑，其制備方法和應用》(申請?zhí)枺?01810104156.2)專利申請制備組合物，經(jīng)檢測組合物中硒含量為0.0062％，維生素C含量為19.96％。為了更進一步對本發(fā)明技術效果進行說明，本發(fā)明選取實施例3所制備的組合物作為試驗樣品，編號為③。選取實施例1準備的富硒酵母、實施例2制備的富硒乳化物、依次編號為①、②開展試驗，結果如下：1.對小鼠腹水型肝癌細胞H22的影響試驗動物及器材：KM小鼠(18-22g)；小鼠腹水型肝癌細胞H22；流式細胞儀(Beck-Man)；蛋白試測定劑盒給樣劑量：根據(jù)本發(fā)明所述組合物(試驗樣品③)60kg成年人給樣劑量確定為1g/天，據(jù)此折算每天小鼠給樣劑量為150mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg，含維生素C 30mg)；依據(jù)等劑量給樣可比原則確定樣品②每天給樣劑量為51.3mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg)，依據(jù)等劑量給樣可比原則，結合國家藥典或相關行業(yè)標準推薦富硒酵母最高日推薦劑量推算樣品①給樣劑量為21.5mg/kg。造模、分組及實驗：KM小鼠40只，體重18-22g,小鼠腹水型肝癌細胞H22體內(nèi)傳代兩次，從荷腹水型肝癌細胞H22的小鼠中抽取含有H22細胞的腹水液，置離心管內(nèi)，離心(1000r/min,10min),棄上清液，PBS(0.15mol/L pH7.2)漂洗3次，細胞計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為107個/ml,分別注入小鼠腹腔，0.2ml/只。次日，將小鼠隨機分為4組，每組10只，設為模型組，富硒酵母組，富硒乳化物組，組合物組，灌胃給藥1次/天，連續(xù)10天，模型組給予等劑量的生理鹽水。注入腹水型肝癌細胞H22前對小鼠進行第1次體重稱量，四天后每兩天測1次體重，計算與第1次體重的差異，以體重差異反應腹水生成量。于造模第10天，末次給藥30min后摘除眼球取血，肝素抗凝。取血20μl加入抗凝管中，分別加入8F和4P兩種試劑10μl，離心(1000r/min,5min)，棄上清液，加入1mlPBS，振蕩，離心，棄清液，再加入0.5mlPBS，振蕩，離心，棄清液，再加入0.5mlPBS，振蕩，流式細胞儀檢測CD8+和CD4+的含量，實驗結果顯示：對荷瘤小鼠CD4+和CD8+的含量影響組別CD4+CD8+CD4+/CD8+模型組36.6±7.228.1±3.21.4±0.3①55.4±5.923.3±4.82.2±0.4②56.7±9.622.7±4.22.5±0.7③55.2±8.220.4±3.53.0±1.1實驗結論：樣品①、②、③組與模型組相比CD8+均降低(P0.01)；樣品①、②、③組與模型組相比CD4+與CD4+/CD8+均明顯升高(P0.05)；樣品③組(本發(fā)明所述組合物)與樣品①、②組相比CD8+顯著降低(P0.01)；且CD4+與CD4+/CD8+顯著升高(P0.01)2.柯薩奇B4和B3M病毒重疊感染對昆明鼠T細胞亞群的影響試驗動物及器材：KM小鼠(18-22g)；北京醫(yī)科大學制備的抗小鼠T細胞單克隆抗體(CD4、CD8)；流式細胞儀。給樣劑量：根據(jù)本發(fā)明所述組合物(試驗樣品③)60kg成年人給樣劑量確定為1g/天，據(jù)此折算每天小鼠給樣劑量為150mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg，含維生素C 30mg)；依據(jù)等劑量給樣可比原則確定樣品②每天給樣劑量為51.3mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg)，依據(jù)等劑量給樣可比原則，結合國家藥典或相關行業(yè)標準，富硒酵母最高日推薦劑量推樣品①給樣劑量為21.5mg/kg。造模、分組及實驗：KM小鼠32只，體重18-22g,將雌鼠隨機分成模型組，富硒酵母組,富硒乳化物組以及組合物組。以上4組動物均自由進食,模型組每天灌胃等劑量的生理鹽水,樣品①、②、③每天分別灌胃相應劑量的富硒酵母，富硒乳化物和組合物。于5周后交配,取7日齡乳鼠供實驗用。取7日齡鼠腹腔注入10-6TCID50CVB4 0.1ml,7天后在同一鼠再次腹腔注入102TCID50CVB3M0.1ml,于感染CVB3M7天后處死。T淋巴細胞亞群的檢驗：常規(guī)方法分離脾細胞,采用北京醫(yī)科大學制備的抗小鼠T細胞單克隆抗體(CD4、CD8),用流式細胞檢測脾臟CD4、CD8，陽性細胞數(shù)。試驗結果顯示：病毒小鼠T淋巴細胞亞群檢查結果組別CD4CD8CD4/CD8模型組6.37±2.454.17±1.231.32±0.23①9.27±1.516.26±1.441.48±0.19②14.72±1.638.57±1.281.63±0.31③21.83±2.1612.17±1.051.97±0.21實驗結論：樣品①與模型組相比CD4、CD8及CD4/CD8有明顯差異(P0.05),樣品②、樣品③與模型組相比CD4、CD8及CD4/CD8均有顯著差異(P0.01)，樣品③與樣品②CD4、CD8及CD4/CD8有明顯差異(P0.01)，即樣品③(本發(fā)明所述組合物)具有顯著提高人體CD4、CD8的水平及CD4/CD8比值的作用。3.對FLV感染小鼠的細胞免疫功能的影響考察指標的確定：為了更進一步對本發(fā)明組合物技術效果進行說明，選取編號為①②③作為試驗樣品，同時設置正常對照組、染毒組和AZT組(陽性對照組)進行對照，以排除造模干擾與誤差。開展對照組和實驗組的小鼠外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的水平的測定。實驗動物及器材：SPF級BALB/C小鼠60只，雌性，體重18～22g，由廣東省實驗動物中心提供。Friend型鼠白血病病毒(FriendLeukemia virus，F(xiàn)LV)引自美國典型培養(yǎng)物收藏中心(American Typical Culture Centre，ATCC)，經(jīng)小鼠傳代增強毒力后制成100g/L脾懸液，-70℃凍存?zhèn)溆谩ｊ栃詫φ账幬稞R多呋定(AZT)由廈門制藥廠生產(chǎn)。造模分組及實驗：SPF級BALB/C小鼠60只，雌性，體重18～22g，平均分為6組，每組10只。正常組以灌胃方式給蒸餾水0.2ml/只；模型組采用FLV腹腔注射感染小鼠，以灌胃方式給蒸餾水0.2ml/只；AZT組(陽性對照組)采用FLV腹腔注射感染小鼠，并以灌胃方式給藥，AZT劑量5000mg/kg；樣品①組采用FLV腹腔注射感染小鼠，并以灌胃方式給藥，樣品①給藥劑量21.5mg/kg；樣品②組采用FLV腹腔注射感染小鼠，并以灌胃方式給藥，樣品②給藥劑量51.3mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg)；樣品③組采用FLV腹腔注射感染小鼠，并以灌胃方式給藥，樣品③給藥劑量150mg/kg(其中含富硒酵母13.5mg，含維生素C 30mg)。在病毒攻擊后1d開始灌胃給藥，給藥21d后剖殺小鼠,對小鼠外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的水平進行測定。結果顯示：小鼠外周血T淋巴細胞亞群水平實驗結論：可以看出：與正常組和AZT組(陽性對照組)相比，模型組外周血T淋巴細胞亞群CD4+(P0.01)、CD8+(P0.05)、CD4+/CD8+(P0.05)均顯著降低，說明模型組小鼠FLV病毒攻擊模型成功建立。樣品③組較染毒組及樣品①②組CD4+、CD8+及CD4+/CD8+檢測水平顯著提高，說明樣品③(即本發(fā)明所述組合物)能有效提升感染FLV病毒小鼠的外周血T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的水平。