[發明專利]circRNA_27455及其檢測試劑與應用

有效

• 申請號: 201811480231.1
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109628446B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 苗向陽;李嬡;解領麗;黃萬龍;張秀秀
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 李紅偉

本發明涉及circRNA_27455及其檢測試劑與應用。現有研究發現的與豬肉品質相關的基因遠遠無法滿足應用的需求，故而，本申請利用二代測序及生物信息學分析的方法，尋找調控豬脂肪沉積的circRNAs。本申請提供的circRNA_27455與豬肌內脂肪含量密切相關，為選育不同肉質品質的種豬提供新的基因標志物。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及circRNA_27455、含circRNA_27455檢 測試劑及其在檢測豬肌內脂肪中的應用。

背景技術

circRNA是一類由特殊選擇性剪切產生的環形內源性分子，呈共價閉合的環 形結構，沒有5'和3'極性，不能被核糖核酸酶降解。在哺乳動物細胞中，circRNA 分布廣泛，含量豐富，且具有穩定性，保守性和組織特異性。已經有研究發現 circRNA與多種疾病相關。但是，circRNA是否參與脂肪沉積與代謝未見于報道。

隨著分子生物學的發展，基因檢測的技術在提高畜牧業育種、改善牲畜肉質 等方面都顯示出很大的潛力。目前研究已經發現部分和豬肉品質相關的基因，但 是仍有大量的新基因有待發現，現有的基因遠遠無法滿足實際生產應用的需求， 故而，本申請結合最新的分子標志物環狀RNA，期望尋找一些新的和豬肉品質 相關的基因。

肌內脂肪是指沉積在肌肉內的脂肪，它和肉質呈正相關。肌內脂肪之所以引 起人們越來越大的興趣，是因為它影響肉質的嫩度和多汁性，特別是肉的多汁性。 當肌內脂肪含量低于2％時，肉的質地和口感都較差，因此，研究肌內脂肪的生 成，對改善肉食香味、提高豬肉的食用價值以及生產有利于人體健康的肉產品具 有重要的意義。

本申請選擇了大白豬和萊蕪豬，前者屬于典型的瘦肉型豬種，肌內脂肪含量 低，而后者肌內脂肪含量高；二者在脂肪沉積方面的顯著差異為脂肪代謝的機制 研究提供了良好模型。結合二代測序及生物信息學分析的方法，本申請尋找到部 分調控豬脂肪沉積的circRNAs，為選育具有不同肌肉品質的種豬提供理論基礎 和機理指導。

發明內容

一種與豬肌內脂肪相關的環狀RNA，命名為circRNA_27455，序列與SEQ ID NO.1具有95％以上序列同源性。

優選的，circRNA_27455序列為SEQ ID NO.1。

一種檢測肌內脂肪的試劑，檢測circRNA_27455的表達水平。

進一步，采用測序技術、核酸雜交技術或核酸擴增技術檢測樣品中 circRNA_27455的表達水平。

優選的，采用高通量測序技術、探針雜交技術、基因芯片技術或熒光定量PCR 技術檢測樣品中circRNA_27455的表達水平。

優選的，試劑包含檢測circRNA_27455的探針或用于熒光定量PCR的引物。

優選的，熒光定量PCR檢測引物序列為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

進一步，樣品為組織，優選的，樣品為肌內脂肪組織，更優選的，樣品為豬 肌內脂肪組織。

進一步，所述核酸擴增技術選自聚合酶鏈式反應(PCR)、逆轉錄聚合酶鏈 式反應(RT-PCR)、轉錄介導的擴增(TMA)、連接酶鏈式反應(LCR)、鏈置換 擴增(SDA)和基于核酸序列的擴增(NASBA)。其中，PCR需要在擴增前將 RNA逆轉錄成DNA(RT-PCR)，TMA和NASBA直接擴增RNA。

本發明中的核酸雜交技術包括但不限于原位雜交(ISH)、微陣列和Southern 或Northern印跡。

本發明的目的在于提供下述任意一項應用：

circRNA_27455在預測或輔助預測豬肉品質中的應用；