[發明專利]一種心肌肌鈣蛋白I的熒光和比色雙信號檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201811480062.1
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109580958B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 楊秀榮;趙佳會;孫健
• 申請（專利權）人: 中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/535;G01N21/64;G01N21/33
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

本發明提供一種心肌肌鈣蛋白I熒光和比色檢測試劑盒及檢測方法，屬于免疫分析領域。該試劑盒包括心肌肌鈣蛋白I、cTnI捕獲抗體、cTnI檢測一抗、堿性磷酸酶標記的二抗、間羥基苯磷酸二鈉鹽、多巴胺。該試劑盒是通過在孔酶標板上依次吸附cTnI捕獲抗體、cTnI和檢測一抗形成類似三明治的結構，加入的堿性磷酸酶標記的二抗特異性地與檢測一抗結合，最后加入底物間羥基苯磷酸二鈉鹽，在堿性磷酸酶的脫磷酸作用下生成間苯二酚，與多巴胺發生反應生成具有強紫外吸收和熒光發射的基團，進而實現對cTnI的定量檢測。該試劑盒的檢測結果與商品化的cTnI ELISA試劑盒的檢測結果相符，可通過熒光激活和顯色反應靈敏檢測cTnI。

技術領域

本發明屬于免疫分析領域，具體涉及一種心肌肌鈣蛋白I的熒光和比色雙信號檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

酶聯免疫吸附分析(ELISA)基于抗原抗體特異性識別作用，并以酶作為信號輸出單元而實現抗原高靈敏檢測的技術，是生物樣品分析中的一個重要的免疫方法。酶廣泛地作為免疫分析中的標記物，基于酶高效的生物催化活性，一個酶分子可以在短時間內將大量的酶底物轉化成產物，從而發揮信號放大的作用，這為分析物的靈敏檢測奠定基礎。堿性磷酸酶(ALP)是一種磷酸水解酶，該酶廣泛分布于人體組織和體液。在堿性環境中，ALP能水解磷酸單酯化合物，切斷底物分子中的磷酸酯鍵，從而脫掉底物中的磷酸基團。該酶的用途廣泛，它可以作為某些疾病的標志物，包括骨病，糖尿病，乳腺癌和前列腺癌和肝炎。此外，ALP由于其較高的催化活性、較好的穩定性、易于和抗體偶聯等特點，也經常作為ELISA的信號輸出酶。

生物標志物可客觀測定和評價普通生理、病理或治療過程中的某種特征性，指示不同的疾病導致的致病過程，生物標志物的監測是基礎和臨床研究中的重要手段。檢查一種疾病特異性的生物標志物，對于疾病的鑒定、早期診斷及預防、治療過程中的監控可能起到重要作用。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌梗死患者血清中的一個重要標志物，正常成年人血清中cTnI濃度通常低于0.2ng/mL，而心肌梗死爆發后，患者血清中cTnI含量在3-6小時內上升至50ng/mL，最后升至550ng/mL左右。因此，cTnI的準確定量對心肌梗死疾病的診斷和監控具有重大意義。

發明內容

本發明的目的是為了提供一種心肌肌鈣蛋白I熒光和比色雙信號檢測試劑盒及檢測方法，該檢測方法準確方便，具有普適性。

為了實現上述目的，本發明的技術方案具體如下：

本發明首先提供一種心肌肌鈣蛋白I的熒光和比色雙信號檢測試劑盒，包括：

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)、cTnI捕獲抗體、cTnI檢測一抗、堿性磷酸酶標記的二抗、包被緩沖液、洗滌液、抗體稀釋液、樣品稀釋液、間羥基苯磷酸二鈉鹽(m-HPP)、多巴胺、封閉液、二乙醇胺(DEA)緩沖液和MgCl₂溶液。

在上述技術方案中，所述的包被緩沖液是pH＝8.0～9.6的10～100mM碳酸鹽溶液。

在上述技術方案中，所述的洗滌液是pH＝7.4的含有0.01～0.5％Tween-20和10～100mM磷酸根/磷酸氫根/磷酸二氫根的混合溶液。

在上述技術方案中，所述的抗體稀釋液是pH＝7.4的含有0.01～0.2％Tween-20和0.1-2％牛血清蛋白的緩沖溶液；所述的樣品稀釋液是含有0.1-2％牛血清蛋白的緩沖溶液。

在上述技術方案中，所述的封閉液是用抗體稀釋液溶解的牛血清蛋白濃度為0.1～5％的溶液。

在上述技術方案中，所述的間羥基苯磷酸二鈉鹽(m-HPP)的濃度為50～500μM，多巴胺的濃度為20～200μM。

在上述技術方案中，所述的DEA緩沖液是濃度為10～200mM、pH 9.5～12.0的溶液，所述的MgCl₂溶液的濃度是0.25～5mM。