[發明專利]一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2及其克隆和應用

在審

• 申請號: 201811476869.8
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109355292A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 單世華;苑翠玲;李春娟;孫全喜;閆彩霞;趙小波;王娟
• 申請（專利權）人: 山東省花生研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/10;A01H6/54
• 代理公司: 北京中北知識產權代理有限公司 11253
• 代理人: 王皎

1.一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2，其特征在于：其具有如SEQ ID No:1所示的核苷酸序列；擴增所述花生種子特異啟動子AHSSP2的引物AHSSP2-F和AHSSP2-R的序列為：

AHSSP2-F：5’-AAGCTTATTTTAATTAACTATTTTTCTAATTAGTTC-3’；

AHSSP2-R：5’-GGATCCGGTGGTGGTGGAATGTGATGATGCTTGAGGAG-3’。

2.根據權利要求1所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2，其特征在于：擴增所述花生種子特異啟動子AHSSP2的PCR反應體系為：ddH2O31μL，含Mg2+的5x HF buffer 10μL；濃度為2.5mM的dNTP2μL；濃度為5μM的AHSSP2-F和AHSSP2-R各2μL；DMSO 0.6μL；Phusion酶0.5μL；基因組模板2μL。

3.根據權利要求1所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2，其特征在于：擴增所述花生種子特異啟動子AHSSP2的PCR反應條件為：98℃預變性30s；98℃變性10s，58℃退火10s，72℃50s，30個循環；72℃后延伸10min。

4.根據權利要求1所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2在驅動外源基因在花生和擬南芥種子中特異表達的應用。

5.根據權利要求4所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2在驅動外源基因在花生和擬南芥種子中特異表達的應用，其特征在于：所述外源基因為GUS基因。

6.一種含有權利要求1所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2的植物表達載體pBI121-AHSSP2。

7.根據權利要求6所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2的植物表達載體pBI121-AHSSP2的構建方法，其特征在于：用限制性內切酶HindIII和BamHI對pEASY-B-AHSSP2和植物表達載體pBI121分別進行雙酶切反應，得到的片段經純化后，在T4連接酶的作用下連接在一起，得到質粒pBI121-AHSSP2。

8.根據權利要求7所述的一種花生種子特異表達啟動子AHSSP2的植物表達載體pBI121-AHSSP2的構建方法，其特征在于：所述pEASY-B-AHSSP2是通過擴增所述花生種子特異啟動子AHSSP2后，回收擴增產物與pEASY-Blunt simple載體連接、熱激法轉化大腸桿菌DH5α，將陽性克隆進行測序，經測序正確后得到的。

9.根據權利要求6所述的植物表達載體pBI121-AHSSP2在制備轉基因植物中的應用。