[發明專利]乙型肝炎病毒前S1抗原特異性單鏈抗體及其應用

有效

• 申請號: 201811476110.X
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN109593130B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 陳安;王治恒;楊明珍;胡川閩
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;G01N33/576;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/20
• 代理公司: 重慶志合專利事務所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

本發明涉及生物制品檢測技術領域，公開了一種乙型肝炎病毒前S1抗原（HBV preS1）特異性單鏈抗體及其應用，該單鏈抗體包括輕鏈可變區、重鏈可變區、連接所述輕鏈可變區與所述重鏈可變區的接頭以及任選的標簽，其中，所述輕鏈可變區的序列如SEQ ID NO：1的第1?117位氨基酸所示，所述重鏈可變區的序列如SEQ ID NO：1的第130?262位氨基酸所示。本發明還公開了上述單鏈抗體的相關應用。本發明的單鏈抗體為全人源單鏈抗體，能和乙型肝炎病毒前S1抗原特異性結合。

技術領域

本發明涉及生物制品檢測技術領域，具體涉及乙型肝炎病毒前S1抗原特異性單鏈抗體及其應用。

背景技術

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）引起的急、慢性肝炎給人類健康帶來了嚴重的威脅，目前全球范圍內約有4億人感染 HBV，每年約有100萬人死于HBV感染相關的疾病。

乙型肝炎病毒前S1抗原（HBV preS1，preS1）是乙肝病毒大蛋白（HBV largesurface protein，LHB）N末端特有的一段結構域。LHB本身存在于感染性病毒顆粒表面，因此，preS1的水平能反映患者體內感染性病毒顆粒的數量，比乙肝表面抗原（HBsAg）能更好地反映HBV的傳染性。流行病學調查表明preS1陽性患者比單純的HBsAg陽性者有更強的傳染性，這使得preS1被作為一種直觀的HBV傳染性評價指標，在乙肝的防控方面具有較大的意義。定量分析HBV感染者血清中LHB水平與HBV DNA的關系，發現LHB水平隨著HBV DNA水平變化而變化，二者之間存在很高的相關性，表明血清 LHBs水平可以反映HBV感染者循環系統中的病毒載量。當HBV基因前C區發生突變或者經抗病毒治療后HBeAg轉陰時，會導致HBeAg檢測陰性，此時preS1檢測可以更準確地反映病毒在體內是否繼續復制。HBV preS1常在病毒感染早期出現，1個月左右消失，preS1轉陰的時間越早，提示急性肝炎的病程越短，預后越好；若preS1持續存在則預示急性乙型肝炎在向慢性乙型肝炎轉變。preS1陽性提示HBV復制活躍，傳染性強；preS1陰性可作為HBV被清除和感染趨于恢復病情趨向好轉的標志。針對HBV感染者血清中preS1含量的連續監測和動態觀察，可以更好地評估患者體內HBV復制狀態、抗病毒療效和患者的預后。

HBV preS1是形成完整HBV病毒顆粒所必需的，其103-119位氨基酸和緊隨其后的preS2 的第1-5 位氨基酸對于 HBV 顆粒的形成至關重要。HBV preS1 介導了HBV結合肝細胞表面受體的功能，目前公認preS1(aa21-47)肽段是HBV進入肝細胞必不可少的，而preS1(aa29-34)－QLDPAF motif是肝細胞受體結合區域。在長度僅百余個氨基酸殘基的 preS1區域內，有數十個T細胞表位和 B 細胞表位。HBV preS1中的線性B細胞表位主要位于其N端和C端，即preS1(aa21-59)和preS1(aa71-119)，并且有文獻報道在preS1(aa34-59)片段內存在構象性B細胞表位，具有很強的免疫原性，能誘發機體產生保護性的抗體，針對preS1(aa37-45)的保護性抗體對黑猩猩HBV感染有很好的預防作用，并證實作用于preS1(aa37-45)的抗體具有良好的體內中和HBV作用。

鼠源性單克隆抗體存在制備成本較高、周期較長、存在一定程度的產品批間差異和應用于人體的異源性的問題。通過建立全人源抗體庫，淘選針對preS1表位肽特異性的全人源抗體，可以有效克服傳統鼠源性單克隆抗體的上述問題，更加經濟地建立HBV preS1免疫檢測試劑盒，制備更加適用的HBV感染預防性產品，為HBV感染的診斷和預防提供重要的新手段和新工具。

因此，開發能夠更有效地結合HBV preS1的HBV preS1特異性全人源單鏈抗體具有重要的實際意義。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有產品存在的上述不足，提供一種HBV preS1特異性單鏈抗體及其應用。