[發(fā)明專利]一種雜多糖PEP及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811472579.6
• 申請(qǐng)日: 2018-12-04
• 公開（公告）號(hào): CN109468352A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘆靜波;張現(xiàn)峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蚌埠學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04;A61K31/715;A61P35/00;C12R1/01
• 代理公司: 安徽合肥華信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

本發(fā)明公開了一種雜多糖PEP及其應(yīng)用，其來(lái)源于南極海洋細(xì)菌發(fā)酵液的分離純化，安全經(jīng)濟(jì)且成本低廉，相比傳統(tǒng)多糖有來(lái)源不受季節(jié)氣溫產(chǎn)地限制，生產(chǎn)周期短，節(jié)約資源等優(yōu)點(diǎn)，能夠通過(guò)線粒體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路這兩條通路誘導(dǎo)WEHI?3細(xì)胞凋亡，令其具有優(yōu)良的免疫和抗腫瘤活性，可為多糖藥物開發(fā)提供重要的技術(shù)支持和研究方向。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雜多糖PEP及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

當(dāng)今社會(huì)，腫瘤的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)且發(fā)病群體年輕化。在過(guò)去的幾十年里，腫瘤是僅次于心腦血管疾病導(dǎo)致死亡的第二大病癥，已然成為威脅當(dāng)今社會(huì)人類健康的重大疾病。白血病，是血液系統(tǒng)里異常的原始造血干細(xì)胞失去了分化成熟的能力而停留在細(xì)胞發(fā)育的不同階段的克隆性惡性腫瘤。臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、嚴(yán)重貧血、淋巴結(jié)腫大及出血，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致急性死亡，是一類危害人類健康的重要的惡性腫瘤。

現(xiàn)階段，各國(guó)的科研人員都試圖從白血病的病因，發(fā)病機(jī)理及治療等方面找到突破，臨床上治療手段主要還是手術(shù)治療，放射性治療和化學(xué)藥物治療這三大治療手段。這三大治療手段都有其治療局限性，人們迫切需要找到一種毒副作用小，普適性強(qiáng)，能有效控制和殺死惡性腫瘤的藥物或者輔助治療藥物，以改善現(xiàn)有的治療方法與策略。新的治療策略不僅要提高治愈率，更要著重提高患者的生活質(zhì)量。

多糖（polysaccharide）是一類具有天然生物活性的聚合物，由10個(gè)及以上單糖連接而成具有多羥基的醛或酮類的化合物，多糖不僅是提供能量和組成結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，還具有抗氧化，清除自由基的功能，多糖在抗腫瘤領(lǐng)域的研究是從上個(gè)世紀(jì)50年代末日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)香菇多糖后開始興起的。微生物多糖相比動(dòng)植物多糖有來(lái)源不受季節(jié)氣溫產(chǎn)地限制，生產(chǎn)周期短，節(jié)約資源等優(yōu)點(diǎn)。發(fā)展前景廣闊，受到科學(xué)家的青睞，在醫(yī)藥食品行業(yè)的應(yīng)用逐漸擴(kuò)大。因此，從可發(fā)酵微生物中尋找高活性的多糖是多糖藥物開發(fā)的重要方向。

南極特殊的極地氣候造就了其微生物擁有著不同于陸生微生物的特殊的生理生化特性。這些生物能夠在極端溫度和鹽度的嚴(yán)酷條件下生存。許多南極細(xì)菌可以產(chǎn)生大量胞外聚合物，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)這些胞外聚合物可以被微生物利用來(lái)創(chuàng)造和維持一個(gè)具有保護(hù)作用的微環(huán)境。但是，這些胞外聚合物具有的生物活性潛力卻還很少被研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種雜多糖PEP及其應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種雜多糖PEP，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，分子量為397kDa。

所述雜多糖PEP由南極海洋細(xì)菌Pseudoaltermonas sp.S-5的發(fā)酵液中分離純化得到。

所述雜多糖PEP的提取方法包括以下步驟：

將南極海洋適冷菌Pseudoaltermonas sp.S-5的種子液接種于2216E培養(yǎng)基中，培養(yǎng)結(jié)束后取發(fā)酵液濃縮后靜置過(guò)夜，離心，收集沉淀，再將沉淀溶于蒸餾水中，離心取上清，將上清用Sevag法脫蛋白，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)試劑，并經(jīng)過(guò)D301R陰離子交換樹脂脫色，收集洗脫液，透析，將得到的溶液冷凍干燥得到胞外粗多糖樣品，將該粗多糖溶于Tris-HCl緩沖液中，離心，經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換柱、SephadexG-75葡聚糖凝膠柱純化得到雜多糖PEP。

所述雜多糖PEP的提取方法包括以下更具體的步驟：