[發明專利]一種生物樣本中mPEG-PLA的定量測定方法

在審

• 申請號: 201811462486.5
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109668977A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 史美云;姜惠;尹磊;徐夢謠
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 李曉亮;潘迅

1.一種生物樣本中mPEG-PLA的定量測定方法，其特征在于，該測定方法采用液相色譜-離子阱質譜，并選取特定質荷比母離子m/z為433.0，子離子m/z為217.0的特異性離子對mPEG-PLA進行定量分析測定，該測定方法包括以下步驟：

步驟A，建立mPEG-PLA測定標準曲線；

步驟B，采用液相色譜-離子阱質譜測定待測樣品，并通過步驟A所得標準曲線計算出待測樣本中mPEG-PLA的濃度；

所述的步驟B與步驟A的色譜條件和質譜條件相同，其中質譜條件為在串聯質譜技術上結合源內裂解技術，質譜部分設定為：mPEG-PLA通過第一個質量分析器Q1，在特定解簇電壓下發生源內裂解，產生并選擇特定質荷比母離子，特定質荷比母離子通過第二個質量分析器Q2；在第二個通過質量分析器Q2中設置碰撞能量，將帶電離子打成碎片離子；在第三個質量分析器中選取穩定的特征碎片作為子離子，進入質量分析器檢測，對mPEG-PLA進行分析定量。

2.根據權利要求1所述的一種生物樣本中mPEG-PLA的定量測定方法，其特征在于：

質譜條件為：正離子方式檢測：離子噴霧電壓：5500V；溫度：500℃；氣簾氣體(CUR)氮氣壓力為35psi；氣體1氮氣壓力(GS1)為50psi、氣體2氮氣壓力(GS1)50psi；mPEG-PLA掃描方式為MRM，解簇電壓為50V，質量分析器Q2中碰撞能量為26eV；

色譜條件為：流動相為甲酸體積百分數占0.1％的水溶液和異丙醇與乙腈體積比為2:1的有機相溶液，梯度洗脫，柱溫40℃，流速0.3mL/min。

3.根據權利要求1或2所述的一種生物樣本中mPEG-PLA的定量測定方法，其特征在于：

所述的步驟A包括以下步驟：

(1)制備內標溶液和梯度稀釋的不同濃度的mPEG-PLA標準溶液；

(2)于抗吸附管中加入內標溶液、空白基質、mPEG-PLA標準溶液和乙腈溶液后渦流混勻，離心后取上清液進樣到高效液相色譜-質譜中進行分析；

(3)取不同濃度的mPEG-PLA標準溶液重復步驟(2)，記錄色譜圖，色譜圖中mPEG-PLA濃度為橫坐標，mPEG-PLA色譜峰面基與內標峰面積的比值為縱坐標，采用加權W＝1/X²最小二乘法進行回歸運算，求得的直線回歸方程即為標準曲線；

所述的步驟B包括以下步驟：

(1)于抗吸附管中加入內標溶液、待測樣本、mPEG-PLA待測樣本和乙腈溶液后渦流混勻，離心后取上清液進樣到高效液相色譜-質譜中進行分析，得到待測樣本mPEG-PLA的峰面積與內標峰面積；

(2)將步驟(1)中獲取的待測樣本mPEG-PLA的峰面積與內標峰面積的比值帶入步驟A得到的標準曲線中，求得mPEG-PLA濃度。

4.根據權利要求3所述的一種生物樣本中mPEG-PLA的定量測定方法，其特征在于：所述的測定方法中內標為奧卡西平，定量離子對為253.3/208.2。