[發(fā)明專利]一種基于CD19和PSMA的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811458426.6
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109468284A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 章睿
• 申請（專利權(quán)）人: 北京美康基免生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;C07K16/28;C07K16/30;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種基于CD19和PSMA的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞，其特征在于，所述雙重嵌合抗原受體包括嵌合抗原受體CD19和嵌合抗原受體PSMA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)、CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和可誘導(dǎo)自殺融合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；

優(yōu)選地，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域為針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體和針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的免疫細胞，其特征在于，所述針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一個：

(I)具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(II)與SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有≥90％，優(yōu)選≥95％，更優(yōu)選≥98％，最優(yōu)選≥99％同源性的氨基酸序列；

(III)與SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列經(jīng)修飾、取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸獲得的氨基酸序列；

所述氨基酸序列具有針對腫瘤表面抗原CD19的單鏈抗體的活性；

優(yōu)選地，所述針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體的氨基酸序列具有(I)、(II)或(III)所示的氨基酸序列中的任意一個：

(I)具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

(II)與SEQ ID NO.2所示氨基酸序列具有≥90％，優(yōu)選≥95％，更優(yōu)選≥98％，最優(yōu)選≥99％同源性的氨基酸序列；

(III)與SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列經(jīng)修飾、取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸獲得的氨基酸序列；

所述氨基酸序列具有針對腫瘤表面抗原PSMA的單鏈抗體的活性。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述跨膜結(jié)構(gòu)域為CD28跨膜結(jié)構(gòu)域和/或CD8α跨膜結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)為CD28信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、CD27信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域或CD137信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域中的任意一種或至少兩種的組合；

優(yōu)選地，所述可誘導(dǎo)自殺融合結(jié)構(gòu)域為包含胱天蛋白酶9結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述胱天蛋白酶9結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

優(yōu)選地，所述可誘導(dǎo)自殺融合結(jié)構(gòu)域通過2A序列與CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域相串聯(lián)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括信號肽、抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)、CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、2A序列和可誘導(dǎo)自殺融合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；

優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體為Secretory信號肽、CD19抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或PSMA抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、CD8α和/或CD28跨膜結(jié)構(gòu)域、CD28信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、CD27信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、2A序列和胱天蛋白酶9結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；

優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體CD19為Secretory-CD19scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；所述嵌合抗原受體PSMA為Secretory-PSMA scFv-CD28-CD27-CD3ζ-2A-FBKP.Casp9；

優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體CD19的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示或與其具有90％以上同源性的氨基酸序列；

優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體PSMA的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示或與其具有90％以上同源性的氨基酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的免疫細胞，其特征在于，所述雙重嵌合抗原受體通過其編碼的核酸序列轉(zhuǎn)染到T細胞中表達；

優(yōu)選地，所述轉(zhuǎn)染的方式為通過病毒載體、真核表達質(zhì)粒或mRNA序列中的任意一種或至少兩種的組合轉(zhuǎn)染到T細胞，優(yōu)選為通過病毒載體轉(zhuǎn)染到T細胞；

優(yōu)選地，所述病毒載體為慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為慢病毒載體。